LASS2抑制内质网途径介导的自噬增强膀胱癌化疗敏感性的机制研究

Bladder cancer (BC) is the most common urological malignancy in China, which is high malignant, the complex process and high chemotherapy resistance, often results in poor prognosis. Therefore, understanding the molecular mechanism of chemotherapy resistance, enhancing the chemo-sensitivity will contribute to the treatment and prevention of the disease. Our previous work showed a relationship between LASS2 and chemo-sensitivity of bladder cancer. Meanwhile, in another study, we found inhibiting LASS2 could affect the growth of bladder cancer cells, and not with the apoptosis of bladder cancer cells. However, it could decrease the apoptosis induced by chemotherapy drug, suggesting that autophagy may be play a role. Then, further investigation confirmed the occurrence of autophagy in above process. Together, we speculated that LASS2 may affect bladder cancer chemo-sensitivity through autophagy induced by Endoplasmic Reticulum Stress (ERs). In this study we first to investigate whether LASS2 truly affect chemo-sensitivity of bladder cancer in vivo and in vitro. Then, we will focus on LASS2 whether can regulate ERs related pathway and inhibit autophagy in this process. Our study will help to understanding the specific mechanisms of LASS2 enhancing chemo-sensitivity of bladder cancer and provide new therapeutic targets for prevention and treatment of bladder cancer.

膀胱癌是我国最常见的泌尿系统肿瘤，其恶性程度高，病情进程复杂，化疗耐受性高，往往导致患者预后情况差。膀胱癌化疗敏感性涉及到多种作用机制，近些年的研究发现自噬在这一过程发挥重要作用。本课题组在对LASS2基因的一项研究工作发现了（1）LASS2与膀胱癌化疗敏感性具有一定的关联性；（2）抑制LASS2能够影响膀胱癌细胞的生长，并未引起细胞的凋亡，但能够降低化疗药物引起的膀胱癌细胞的凋亡，这提示我们可能存在自噬的发生，随后实验室进一步检测确认了上述过程中的细胞自噬现象。结合已报道的研究，我们提出了科学假设——LASS2基因可能通过内质网途径诱导自噬进而影响膀胱癌化疗敏感性。本项目拟在前期发现的基础上，从细胞和动物两个水平上深入研究LASS2对膀胱癌化疗敏感性的影响，了解其诱导自噬的分子机制，并利用多种生物学技术手段揭示自噬在LASS2影响膀胱癌放疗敏感性中所起到的重要作用。

背景：膀胱癌是我国最常见的泌尿系肿瘤，研究发现LASS2与膀胱癌化疗敏感性有关联，且抑制LASS2能影响膀胱癌细胞的生长却未引起细胞凋亡，但能降低化疗药物引起的膀胱癌细胞凋亡，提示其中可能存在自噬的发生，因此我们提出科学假设即LASS2基因可能通过内质网途径诱导自噬进而影响膀胱癌化疗敏感性，为临床对膀胱癌的化疗提供一种新思路。.方向：主要为明确LASS2是否影响膀胱癌化疗敏感性，探讨LASS2影响膀胱癌化疗敏感性的分子机制，以及自噬在LASS2影响膀胱癌化疗敏感性过程中的作用，明确LASS2影响膀胱癌化疗敏感性中可能涉及到的自噬相关信号通路。.主要内容：构建LASS2稳定过表达膀胱癌细胞系，检测其对ADM的耐受性，对试验用膀胱癌耐药细胞株、敏感细胞株及化疗药物进行筛选，探讨LASS2过表达对膀胱癌细胞化疗敏感性的影响以及内质网应激在其中发挥的具体作用，以及化疗药物ADM处理下LASS2过表达对膀胱癌耐药细胞株细胞活力的影响，并探讨LASS2过表达对膀胱癌细胞中由ADM诱导的自噬水平的调控作用，最后进行ERs相关信号通路的检测。.重要结果和关键数据：过表达LASS2能增加耐药细胞株对ADM的敏感性。通过CCK-8及qPCR实验筛选了Biu87-R、T24及实验用化疗药物ADM进行后续实验；通过质粒构建、转染及Western blot等实验发现LASS2过表达对膀胱癌细胞化疗敏感性的增强作用以及拮抗ADM诱导的内质网应激，促进膀胱癌细胞内质网应激性凋亡上所发挥的重要作用。LASS2能显著增强膀胱癌耐药株细胞对ADM的药物敏感性；ADM能诱导膀胱癌Biu87-R、T24细胞中自噬的发生，在无ADM干预的细胞中，LASS2过表达并不影响细胞内的自噬水平，而在ADM干预下，LASS2过表达能显著抑制膀胱癌Biu87-R、T24细胞中的自噬水平。LASS2过表达能够通过抑制ERs经由PERK/eIF2α信号通路介导的自噬，进而降低膀胱癌细胞的化疗耐药性。.科学意义：进一步揭示LASS2—ERs介导的自噬对于影响膀胱癌化疗敏感性中的重要作用，有助于了解自噬在膀胱癌化疗敏感性上的分子机制，丰富膀胱癌化疗的潜在应用手段。