补肺益肾方药调控树突状细胞MAPK信号通路治疗COPD的机制

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是严重危害公众健康的重大疾病，目前缺乏有效的干预手段，控制肺部慢性炎症是治疗COPD的重点。树突状细胞（DCs）的成熟障碍在COPD的慢性气道炎症中起着关键作用。基于确证的补肺益肾方药治疗COPD的临床疗效。本项目拟研究内容为：①基于大鼠稳定期COPD模型，设对照组、模型组和补肺益肾高、中、低剂量组及地塞米松组。采用病理学、免疫组织化学方法，从肺脏组织病理、肺功能学评价治疗效果，重点通过流式细胞仪技术观察肺和气道内DCs数量和表型的变化、外周血及气道T淋巴细胞变化；②采用血清药理学、细胞生物学和分子生物学方法，观察大鼠骨髓培养DCs表型和吞噬功能及TLR基因表达，重点测定MAPK信号通路及下游细胞因子的变化。通过研究，评价补肺益肾方药对DCs成熟的影响，基于调控DCs细胞MAPK信号通路，阐释补肺益肾方药治疗COPD的作用机制，为临床应用提供科学依据。

目的：观察补肺益肾方对慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠肺树突状细胞（DC）功能及MAPK信号通路的影响。.方法：SD大鼠随机分为对照组、模型组、补肺益肾方高、中、低剂量（高、中和低剂量）组和地塞米松组，每组12只。采用香烟熏吸联合细菌感染法制备COPD稳定期大鼠模型。第9~20周，各组分别给予相应药物灌胃，结束后取材。采用WBP法检测肺功能；采用病理技术观察肺组织形态学；采用流式细胞术（FCM）检测外周血和BALF T细胞亚群及肺单细胞悬液和BALF DCs表型。采用ELISA、FCM、qPCR和Western blot等检测体外培养的DC表型、吞噬功能、细胞因子分泌及MAPK通路相关指标。.结果：①COPD大鼠表现出精神倦怠，活动量减少，体重增长减慢，肺功能降低等，各治疗组均可改善上述症状，以高、中剂量组明显。②COPD大鼠肺组织表现为慢性气道炎症、肺气肿、肺小动脉和小气道重塑等。超微结构上可见呼吸膜不完整、Ⅱ型细胞线粒体减少、嵴消失、板层小体增多增大。各治疗组均不同程度改善，以高、中剂量组显著。③模型组外周血CD4+、CD4+/CD8+降低，CD8+升高；高、中剂量组CD4+、CD4+/CD8+升高，CD8+降低；地塞米松组CD8+降低，较低剂量组升高；高、中剂量组疗效优于低剂量组和地塞米松组。BALF中各指标变化一致。④模型组肺单细胞悬液和BALF中DCs OX62+、OX62+MHCII+、OX62+CD80+、OX62+CD86+均较对照组升高，高、中剂量组上述指标较模型组降低，低剂量组OX62+MHCII+、OX62+CD86+降低，地塞米松组OX62+、OX62+MHCII+、OX62+CD86+降低。高、中剂量组改善尤为显著。⑤体外实验表明，补肺益肾方和地塞米松可以降低正常和LPS刺激的DC细胞OX-62、MHC II、CD80和CD86表达，提高DC细胞吞噬功能和IL-6、IL-10分泌，降低IL-12p40、IL-12p70、IFN-γ和TNF-α，上调TLR2和TLR4基因和蛋白表达。补肺益肾方较地塞米松组显著降低。补肺益肾方在抑制炎症因子合成和分泌方面与ERK、JNK和p38抑制剂有一定的协同作用。.结论：补肺益肾方治疗COPD稳定期疗效显著，可改善T淋巴细胞亚群，抑制DCs成熟，减少DC炎症因子释放，其机制可能与调控MAPK通路有关。