自身免疫性T细胞的抗原决定簇在抗肾小球基底膜病发病中的启动机制

抗肾小球基底膜（GBM）抗体是抗GBM病的致病性抗体。我们的前期工作发现该抗体的免疫学特性的转换，如亲和力的成熟、抗体亚型的转换以及抗原决定簇的扩展与疾病的发生和进展密切相关。自身抗体免疫学特性的转换受到T细胞调控，而自身免疫性T细胞所识别的抗原决定簇是其活化及增殖的启动因素，并介导B细胞产生针对此线性肽段的自身抗体，随后发生抗原决定簇扩展。我们推测，在疾病初期，自身免疫性T细胞及自身抗体所识别的线性抗原决定簇可能是疾病发生的关键，后期的抗原决定簇扩展则可能与疾病严重程度相关。本课题拟利用正常人、肾损害较轻直至肾衰竭的患者组成的疾病演变过程，研究自身免疫性T细胞及抗GBM抗体的线性抗原决定簇及其表位扩展规律，阐明起病最初的关键抗原靶位，寻找可能的致病因素；同时以核心氨基酸为探针，明确自身免疫性T细胞介导抗体产生以及对肾脏的直接损伤机制，共同阐明线性抗原决定簇启动疾病发生发展的免疫炎症机制。

抗肾小球基底膜（GBM）病是病情最重、预后最差的肾小球疾病。我们的前期工作发现抗GBM自身抗体的免疫学特性的转换与疾病的发生和进展密切相关。我们推测，在疾病初期，自身免疫性T细胞及自身抗体所识别的线性抗原决定簇可能是疾病发生的关键，后期的抗原决定簇扩展则可能与疾病的严重程度相关。本课题中，我们将正常人、肾损害较轻、较重、直至肾衰竭的患者分成不同组，形成了疾病的演变过程，在此过程中，（1）我们检测了抗GBM抗体识别的抗原表位，发现在疾病发病过程中，自身抗体识别的抗原表位存在分子内的抗原表位扩展；（2）81%的患者血清中能够检出识别α3(IV)NC1上线性肽段的自身抗体，其中识别率最高的是P14、P16和P18；（3）这些线性肽段同时能够刺激抗GBM病患者的外周血单个核细胞（PBMC）增殖，其中具有显著意义的是P14和P19，因此我们发现P14是自身免疫性T细胞和B细胞同时识别的抗原表位，可能是起病最初的关键抗原表位；（4）我们进一步利用P14免疫WKY大鼠，成功地诱发了抗GBM肾炎的大鼠模型，证实了P14的致肾炎作用；免疫后大鼠会出现抗原表位扩展，这些大鼠的肾脏损害更为严重，肾组织中新月体的比例更高，证实了我们在患者中的发现以及本研究的假设。（5）随后，我们将P14上的22个氨基酸进行逐一替换，鉴定每一个氨基酸的致病性，确定了T细胞识别的关键氨基酸基序为WIxLW；（6）同时，我们利用患者的循环抗体检测和氨基酸替换，确定了B细胞识别的关键氨基酸基序为GFxF。本研究首先发现了Goodpasture抗原上具有致肾炎作用的T细胞抗原表位，并且确定了该抗原表位上的关键氨基酸基序，同时证明了抗原表位扩展在抗GBM病发病机制中的重要作用。本研究成果为进一步通过分子模拟机制阐明抗GBM病的病因研究奠定了基础，同时为开发具有疾病特异性的免疫治疗提供了线索。