单子叶植物葡萄风信子蓝色花形成分子机理研究

According to the metabolite profiling in 16 monocotyledonous blue flowers, one of the most representative plant, Grape hyacinth, was selected and used to establish flower transcriptome databases. Through a combination of chemical analysis with bioinformatics, the major metabolic pathways and key functional genes related to blue pigmentation of Muscari flower were deduced. Here, we try to clone the color-related functional genes and respective promoter sequences;RT-PCR and enzymatic reaction are used to study the relationship between the transcrips of key genes involved in blue color formation and the respective products.To observe their function in the anthocyanin accumulation process, up or down regulation of the expression of key functional genes are performed in the early flowering systems of grape hyacinth; The dual fluorescence complementary experiments are used to detected the interaction between the transcription factors and functional genes; Different flowers collected from the generations of interspecific hybridization are used to study the color-related genetic segregation of grape hyacinth. This study aimed to reveal the roles of functional genes and transcription factor genes in the blue color development of Muscari flowers；2, to establish a system method for the research on the color formation mechanism in monocotyledonous plant; 3, provide specific gene resources for blue color directional improvement in monocotyledons.

前期研究对16种单子叶植物蓝色花的代谢谱和极具代表性的葡萄风信子转录组测序，结合转录组和代谢谱数据,初步推定了葡萄风信子的花色代谢途径和关键功能基因。本研究将进一步克隆葡萄风信子花色相关功能基因全长与启动子；RT-PCR和酶促反应明确蓝色形成关键基因转录与产物关联特性；利用早花体系在葡萄风信子中上调或抑制关键基因的表达，验证其在花色形成中的功能；双荧光互补研究花色形成关键转录因子对蓝色相关功能基因的调控关系；通过研究蓝白葡萄风信子杂交后代中花色物质、关键功能基因和转录因子的遗传分离规律，定位葡萄风信子蓝色形成关键基因。研究目的：1.揭示葡萄风信子蓝色形成功能基因及转录因子基因对花色形成的调控方式，为研究蓝色花代谢途径和分子机理提供深层次的理论依据；2.建立一套适用于单子叶植物（特别是无参植物）花色差异形成机理的系统研究方法；3.在育种实践上为单子叶植物蓝色花定向改良提供特异基因资源。

前期研究对16种单子叶植物蓝色花的代谢谱和极具代表性的葡萄风信子转录组测序，结合转录组和代谢谱数据,初步推定了葡萄风信子的花色代谢途径和关键功能基因。本研究从葡萄风信子中克隆蓝色呈色关键结构基因DFR、FLS全长与启动子；RT-PCR表明DFR基因表达与花色素积累高度协同。DFR启动子也表现出明显的花组织优势表达活性。体外酶促反应显示该基因能够催化二轻黄酮醇底物形成有色的花青素。在烟草中上调DFR基因可以促进花青素积累，使转基因花瓣颜色加深。而过量表达FLS基因会使黄酮和黄酮醇等无色类黄酮物质积累量增加，抑制花青素合成通路上各个节点基因，导致花色苷含量降低，花色变浅。暗示了DFR和FLS在葡萄风信子花色形成中发挥了关键作用。葡萄风信子转录因子MaMybA1不但调控烟草花青苷合成，还调控黄酮醇的合成。双荧光互补研究表明花青苷的积累可能与MaMybA1靶向MaDFR和MaANS有关；而黄酮醇的含量显著增加，表明MaMybA1除了调控早期基因MaCHI外，还可能正向调控MaFLS，增加黄酮醇的合成；MaMybA2主要通过与bHLH转录因子互作形成复合物调控MaDFR和MaANS的表达，从而促使花青素的合成。MabHLH1单独过量表达不能促使烟草花青素合成。但分别MaMybA1, MaMybA2互作后，可显著增加二者在花青素代谢途径中的调控功能。可以推测，在葡萄风信子类黄酮代谢途径中，MaMybA1和MaMybA2是调控葡萄风信子花色形成的关键转录因子，晚期基因MaDFR和MaANS在花青素合成中起着非常重要的作用。同时，MaMybA1可能也是调控葡萄风信子黄酮醇合成的转录因子，而MaCHI和MaFLS在葡萄风信子黄酮醇合成路径中起着关键作用。本研究揭示了葡萄风信子蓝色形成功能基因及转录因子基因对花色形成的调控方式，为研究蓝色花代谢途径和分子机理提供深层次的理论依据，为育种实践上为单子叶植物蓝色花定向改良提供特异基因资源。