CUEDC2基因敲除对Her2诱发乳腺癌的影响及机制研究

CUEDC2是近年来发现的一个新的炎症抑制因子（Nat Immunol），并参与乳腺癌细胞生长调控（EMBO J）。本项目前期工作对400多例乳腺癌临床标本分析发现，CUEDC2在乳腺癌中高表达，并影响乳腺癌预后。进一步机制研究表明，CUEDC2通过调控细胞周期，使细胞具有转化能力。基于以上基础，本项目提出进一步研究CUEDC2在乳腺癌发生、发展中的作用。主要策略是在自发乳腺癌的Her2等转基因小鼠中敲除cuedc2基因 （Her2在25-30%的乳腺癌中过度表达或激活突变；Her2转基因鼠（T50 = 210天）是近年来最常用的乳腺癌动物模型之一），阐明CUEDC2是否是乳腺癌发生所必须的，及其作用机制。目前，我们已经成功制备cuedc2基因敲除小鼠，并获得Her2转基因鼠，在此基础上的进一步研究有可能揭示乳腺癌发生中的一个重要分子事件，并为乳腺癌治疗提供新的靶标。

乳腺癌是近年来女性中发病率最高的恶性肿瘤，每年约有40万患者死于乳腺癌，CUEDC2 是近年来发现的一个新的炎症抑制因子，并参与乳腺癌细胞生长调控。本项目前期工作对400 多例乳腺癌临床标本分析发现，CUEDC2 在乳腺癌中高表达，并影响乳腺癌预后。进一步机制研究表明，CUEDC2 通过调控细胞周期，使细胞具有转化能力。本项目进一步研究CUEDC2 在乳腺癌发生、发展中的作用。主要策略是在自发乳腺癌的Her2 等转基因小鼠中敲除cuedc2 基因 （Her2 在25-30%的乳腺癌中过度表达或激活突变；Her2 转基因鼠（T50 = 210 天）是近年来最常用的乳腺癌动物模型之一），阐明CUEDC2 是否是乳腺癌发生所必须的，及其作用机制。为了更好地研究CUEDC2的功能，本研究引入Tet-on四环素基因诱导表达系统来构建乳腺特异表达CUEDC2的转基因小鼠。构建了稳定过表达CUEDC2及其突变体的MCF-10A细胞系，在细胞水平研究CUEDC2 对细胞增殖，转化，迁移及浸润的影响，以及CUEDC2对Her2 信号通路的影响及其生物学功能，使用稳定表达CUEDC2的乳腺癌细胞株MCF7-MSCV-GPF-CUEDC2，完成了裸鼠体内肿瘤细胞异位接种实验，分析CUEDC2促进肿瘤形成及转移能力。目前结果发现在分子细胞水平EGF生长因子刺激会导致CUEDC2发生磷酸化；通过细胞计数实验和Brdu掺入实验证明CUEDC2在MCF-10A细胞中的过表达能够促进细胞的增殖；验证HER2基因能够在MCF-10A细胞中促进细胞的EMT过程，同时细胞迁移实验和transwell实验，也明确了HER2基因能够促进细胞的迁移和浸润。进一步研究发现CUEDC2在 Her2转化的MCF10A细胞中表达上调，而且在小鼠水平检测发现NeuT-induced小鼠乳腺肿瘤中表达也是显著上调的。但是在动物水平实验组中，裸鼠体内肿瘤细胞异位接种实验表明，CUEDC2能够促进乳腺癌细胞的生长及成瘤过程，但是初步的整体小鼠观察实验提示，CUEDC2转基因并没有增加Her2小鼠的致瘤率，也没有缩短半数成瘤时间T50，Her2 转基因鼠与CUEDC2敲除小鼠交配得到的小鼠，乳腺癌发生率也并无显著差别，其中机制有待进一步深入研究。