肝星状细胞免疫抑制特性在肝癌发生发展中的作用

癌症的发生与其生存微环境密切相关，其中与肿瘤发生发展的微环境最直接相关的是基质细胞。肝星状细胞HSCs作为肝脏最重要的基质细胞，一直是肝炎后肝硬化的研究热点，近年来发现HSCs激活后具有极强免疫抑制作用，而其免疫特性对肝癌的发生发展有何影响，尚不清楚。.在前期工作中，我们发现在正常免疫小鼠的皮下移植瘤模型中，活化的HSCs能够通过促进细胞增殖、血管生成及抑制肝癌组织中T细胞浸润等促进肝癌发生发展。为了进一步深入研究HSCs的免疫抑制功能与肝癌发生发展关系,揭示肝癌免疫逃逸机制与微环境的关系。我们通过建立正常免疫小鼠肝癌原位模型将活化的HSCs与小鼠肝癌细胞共同接种肝脏，研究活化的HSCs对肝癌发生发展的影响及HSCs对局部乃至全身免疫功能的影响；同时检测临床肝癌组织中活化HSCs，并将其与免疫细胞表达、肿瘤分期、复发及预后作相关性分析,为临床以HSCs作为免疫干预的新靶点提供实验依据。

HSCs是肝脏纤维化进程的明星细胞。研究表明HSCs具有极强的免疫抑制作用，能延长胰岛移植物的存活时间，但其免疫活性与肝癌发生发展之间的关系尚不清楚。在本项目的资助下，我们取得了如下研究成果：1）我们建立了分离小鼠HSCs的方法，系统研究了HSCs的免疫学特点并阐明其免疫抑制活性的机制。我们发现活化的HSCs能介导T淋巴细胞的低反应性，促进T细胞的凋亡；增加调节性T细胞的比例；削弱细胞毒性T细胞对靶细胞的杀伤能力；还能通过分泌具有免疫抑制或调节功能的细胞因子以及上调混合淋巴反应中有免疫抑制或调节功能的细胞因子，促进肝癌细胞增殖、迁移与侵袭能力。HSCs通过诱导T细胞的低反应性可能促使肿瘤细胞逃脱免疫攻击，促进肿瘤发生发展。相关成果发展在SCI期刊International Journal of Oncology。2）我们建立小鼠原位肝癌移植模型，分为单纯肝癌细胞组和肝癌细胞联合HSCs组，结果显示活化的HSCs能够抑制脾脏中T细胞及其亚群的表达，并促进脾脏以及肿瘤微环境中调节性T细胞Tregs以及髓系来源抑制性细胞MDSCs的表达，表明HSCs能够促进负性免疫调控细胞的表达从而促进肝癌的发生发展，阐明了HSCs促肝癌的新机制。相关结果发表在SCI期刊Laboratory investigation。3）我们以HSCs作为靶标，寻找可以逆转HSC免疫抑制活性的药物抑制肝癌的生长，发现18β-甘草次酸能够通过减少T细胞的凋亡和调节性T细胞的表达，逆转肝星状细胞对T细胞的免疫抑制特性；进而增加T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，并降低肿瘤细胞的侵袭能力。进一步的动物实验表明，18β-甘草次酸能够通过抑制肝星状细胞的活化从而阻止肿瘤的生长，减少血管淋巴管的生成，并增强局部抗肿瘤免疫反应。相关成果发表在International Journal of Cancer。4）为了进一步阐明HSCs对免疫抑制细胞髓系来源抑制性细胞MDSCs的具体调控机制和作用方式，我们首先建立了流式分选荷瘤小鼠MDSCs的方法。为了进一步研究MDSCs亚群，我们还建立流式分选和磁珠分选方法分选荷瘤小鼠脾脏中PMN-MDSCs和Mo-MDSCs，并比较了这两种分选方法的异同点。相关结果发表在International journal of clinic and experimental pathology。