P16、RASSF1A基因甲基化与肺癌及烟焦油相互关系研究

肺癌的发生受基因和基因外的多种因素的影响, 基因改变包括：突变、基因缺失等; 基因外改变即表遗传学改变, DNA甲基化是最重要的一种表遗传修饰方式, 通过调节癌基因激活、抑癌基因失活和染色体的不稳定性, 在肿瘤发生过程中起着关键性的作用。本项目采用甲基特异性PCR(MSP)法，研究蒙族和汉族肺癌患者与正常人之间的P16和RASSF1A基因甲基化程度的差异；B[a]P对支气管上皮细胞P16和RASSF1A基因甲基化的影响以及被动吸烟对小鼠肺组织P16和RASSF1A基因甲基化的影响。 研究内蒙古地区蒙、汉族人群肺癌是否与P16和RASSF1A基因甲基化有关；从细胞水平和整体水平研究烟焦油和被动吸烟是否可以影响P16和RASSF1A基因的甲基化，进一步探讨P16、RASSF1A基因甲基化与肺癌以及烟焦油的相互关系。本研究对肺癌发病机理的探讨和肺癌的诊断和预防将起到积极的推动作用。

本项目（1）采用MSP法检测汉族正常人和肺癌患者各130例的血液标本中p16、RASSFlA两种基因启动子区甲基化状态。结果显示：130例肺癌患者血液样品中分别发现51例(39.2 %) p16基因启动子异常甲基化和56例(43.07 %)RASSF1A基因启动子异常甲基化，130例正常对照血液组检测到p16、RASSF1A基因启动子的异常甲基化分别2例（1.53 %）和1例（0.77 %），差异有统计学意义，P<0.001 。其次对肺癌患者p16和RASSF1A基因甲基化与吸烟的关系进行了分析，结果表明：p16和RASSF1A基因甲基化水平有升高趋势，但没有统计学意义；另外，对单基因与多基因联合检测做了对比研究，结果显示单独检测p16、RASSF1A基因启动子区异常甲基化敏感性分别为39.23%和43.07%，联合两个基因检测用于诊断肺癌的敏感性提高到55.38%，较单个基因检测有所提高，多项指标联合检测可提高检测的灵敏度和阴性预测值。（2）采用MSP法检测不同浓度的B(a)P对原代大鼠气管-支气管上皮细胞p16、RASSF1A基因启动子区甲基化程度的影响。结果显示：0.l、l.0、10µmol/L三个浓度B(a)P分别作用大鼠气管-支气管上皮细胞24、48、72h后，p16、RASSF1A基因启动子区均未发生甲基化，并通过测序验证。（3）采用Meta-analysis方法研究p16、RASSF1A基因甲基化与中国人群肺癌易感性的关系。①Meta-analysis结果显示：纳入国内外关于p16基因甲基化与肺癌易感性关系标准的文献10篇，共有549例NSCLC患者，对照组513例。p16基因甲基化病例组与对照组的比值比(OR)为6.76，95%CI为(4.79%~9.54%)，差异有统计学意义(P<0.05)。②纳入国内外关于RASSF1A基因甲基化与肺癌易感性关系标准的文献8篇，共777例NSCLC患者，对照组596例。RASSF1A基因甲基化病例组与对照组的比值比(OR)为4.46，95%CI为(3.35%~5.94%)，差异有统计学意义(P<0.05)。(4)采用焦磷酸测序法检测被动吸烟对小鼠肺组织中p16、RASSF1A基因甲基化的影响程度, 结果显示：空白、低剂量、中剂量、高剂量组均未检测出p16、RASSF1A基因甲基化。