草酸转化微生物的筛选及其酶基因克隆

植物病原真菌分泌的草酸是重要的致病因子。本研究从中南地区不同省、不同基质上共聚样67份，通过研制出选择性培养基及多步筛选方法，分离筛选出高效降解草酸的细菌菌株11个，真菌1个。初步鉴定了其中3个菌株，研究了其生化培养特性（生长的适宜pH值和温度，C源和N源利用特点、抗生素抗性等）。所获菌株的草酸代谢能力变幅为3-136mg（单菌落摇瓶培养48h）。菌株N-3和YC-31通过代谢毒素草酸而对油菜菌核病的防治效果分别为65.4%和43.3%。通过基因组克隆的方法，即先将细菌基因组部分酶切、组装、感染大肠杆菌，再对抗性克隆逐一通过化学方法测定筛选，获得了含目的基因的基因组片段（约20kb）。进一步亚克隆获得了约11kb的含目的基因的DNA片段。