香蕉ACC氧化酶基因克隆及其反义基因的构建和转化

根据兰花、水稻等植物已知的ACC氧化酶cDNA部分同源序列分别设计三个不同区域的引物，采用PCR技术从香蕉果实分离克隆到该基因的中间部分序列，又采用RACE技术分别扩增到该基因的5′端和3′核苷酸序列。这样终于得到该基因全长cDNA的核苷酸为1152bp，序列分析结果表明香蕉ACC氧化酶的cDNA的编码序列为954bp，编码318个氨基酸，由此推测的分子量约36KD,等电点PI为5.24，与水稻、兰花的ACC氧化酶同源性为70%。原位分子免疫杂交结果显示ACC氧化酶是韧皮部的细胞里表达将香蕉氧化酶cDNA的中间部分序列552bp反向。构建反义基因并通过微导入和电击法转化香蕉细胞，分子杂交检测结果证明该反义基因已经转化到细胞组织。