靶向EphB4的放射性分子探针在体诊治评价

Targeting receptor tyrosine kinases (RTKs) in cancer diagnosis and treatment is still the main focus in many anticancer research. Eph receptors (Ephs) are the largest subfamily of receptor tyrosine kinases. Eph receptor tyrosine kinases and their ephrin ligands are involved in various signalling pathways and mediate critical steps of a wide variety of physiological and pathological processes. Increasing experimental evidence demonstrates that both Eph receptor and ephrin ligands are overexpressed in a number of human tumours, and are associated with tumour growth, invasiveness and metastasis. EphB4 kinases plays key roles in the development of the tumor develop and matastis. Increasing evidence showed that over express EphB4 is a predict for colorectal cancer who may not response to Avastin. In this regard, targeting EphB4 for anticancer therapies for EphB4 over express tumours is of great potential for anticancer research. Our research group had developed a small molecule peptide named TNYL-RAW, which has a high specifity that targeting EphB4. Human monoclonal antibody hAb131 also has highly specifity to EphB4. Radio isotope 188Re has an excellent characteristics for in vivo therapeutic and imaging. In this regard, we use 188Re labeled small molecular probes TNYL-RAW and humanized antibody hAb131 targeting EphB4. Aim at developed a radioimmunotherapy agents targeting tumor over expressed EphB4. Preliminary experiments confirmed that this concept is feasible.

靶向受体酪氨酸激酶对肿瘤的诊治仍是研究的热点。Eph受体家族及其配体Ephrin是目前已知的酪氨酸蛋白激酶受体家族中最大的一个亚家族，EphB4在肿瘤血管形成、肿瘤的转移、侵袭中发挥着重要作用。靶向EphB4对肿瘤进行诊治，已成为热点。已有多种靶向EphB4的药物研制成功。但不同肿瘤EphB4的表达量不同，迫切需要活体监测肿瘤EphB4的表达，及时反应肿瘤治疗后的变化。课题组一直致力于靶向EphB4家族的研究，已研制出靶向EphB4的小分子多肽TNYL-RAW，具有高度EphB4靶向性，人源性单克隆抗体hAb131对EphB4也有高度靶向性。188Re具有优良γ和β特性，适用于体内治疗和显像，因此本课题拟利用188Re标记靶向EphB4的小分子探针TNYL-RAW和单抗hAb131，研制出靶向肿瘤EphB4的放射免疫治疗及显像分子探针，用于肿瘤的治疗及体内可视化研究。预实验证实该方法可行。

EphB4在多种肿瘤中高表达，与肿瘤生长、转移、新生血管形成及预后有关。靶向EphB4对肿瘤诊治已成为热点。由于不同肿瘤EphB4的表达量不同，活体监测肿瘤EphB4表达及肿瘤治疗后变化十分关键。课题组首创性合成小分子多肽TNYL-RAW，具有高度EphB4靶向性，人源性单克隆抗体hAb131对其也有高度靶向性。利用SPR验证体外特异性结合，显示多肽与EphB4的特异性结合Kd值为8.007nM。细胞免疫荧光验证多肽与靶蛋白的结合荧光情况与抗体和靶蛋白荧光情况一致。用131I标记多肽TNYL-RAW，标记率为99.3%，在血清和PBS中稳定性较佳。在高表达EphB4的A2780荷瘤鼠模型给药后进行小动物SPECT/CT成像、生物分布及放射自显影。肿瘤部位在给药后1小时即可见到放射性浓聚，4小时后几乎代谢完全。肿瘤部位给药1h后ID%为3.26±0.64%，放射自显影结果与生物分布相符。结果证实131I-TNYL-RAW可以作为靶向EphB4的特异性分子探针，在体检测肿瘤EphB4表达以及监测靶向EphB4治疗效果。188Re具有优良γ和β射线特性，适用在体显像和治疗，本研究利用188Re标记小分子探针TNYL-RAW和单抗hAb131，研制出靶向肿瘤EphB4的放射免疫治疗及显像探针，用于肿瘤的治疗及体内可视化研究。188Re-His-TNYL-RAW标记率可达94.08%，12小时后标记率仍保持91.43%。在高表达EphB4的PC-3荷瘤鼠行SPECT/CT显像，给药后30min可见到188Re-His-TNYL-RAW在肿瘤部位少量放射性浓聚，1小时后肿瘤摄取增加。188Re-hAb131标记率达到90.26%，12小时后标记率仅为70.92%。PC-3荷瘤鼠SPECT/CT显像显示给药后2小时未见肿瘤部位188Re-hAb131摄取，6小时后肿瘤少量放射性浓聚，24小时肿瘤放射性摄取较前无明显增加。在前期研究基础上，课题组创新性的标记合成了靶向EphB4的特异性分子探针131I-TNYL-RAW，能够在体检测肿瘤EphB4表达情况以及靶向EphB4治疗效果监测。在本项目基金支持下，共发表论文25篇，其中SCI论文19篇，SCI 影响因子>5.0 分论文3篇，中文期刊论文6篇，课题组成员出国交流5次，授权专利1项，获得软件著作权1项。