核质蛋白在版纳微型猪近交系克隆胚胎染色体重组过程中的作用研究

核质蛋白（nucleoplasmin）是一种酸性、磷酸化的耐热蛋白质，属分子伴侣家族的一员，在体细胞核移植胚胎重新编程过程中发挥重要的作用，但核质蛋白的作用仅在低等动物中得到研究。本申请以版纳微型猪近交系高世代亚系为研究材料，利用免疫组化技术及蛋白检测试剂盒，从分子水平上研究体外成熟不同时期猪卵母细胞质中核质蛋白的定性及定量表达，并从卵母细胞质中提取纯化核质蛋白，明确在体外条件下核质蛋白在组蛋白-组蛋白交换过程中的作用，并将外源核质蛋白连同体细胞一同注入卵母细胞质中，使其在克隆胚胎染色体重组过程中发挥作用，为近交系的体细胞核移植技术应用于转基因等提供技术支持。同时，采用Southern blot技术检测Npm基因在卵母细胞质中的表达情况，为今后研究该基因的表达调控提供基础。

核质蛋白是一种酸性磷酸化的耐热蛋白质，属分子伴侣家族的一员，在体细胞核移植胚胎重编程过程中发挥重要的作用。本项目采用免疫组化方法和Western blot方法检测体外成熟不同时期卵母细胞质中核质蛋白的定性及定量表达，结果表明猪卵母细胞质中存在核质蛋白表达，且随着卵母细胞成熟进程的推进，核质蛋白表达量增加。采用real-time PCR技术检测编码核质蛋白的Npm基因的表达水平，结果表明卵母细胞体外成熟过程中Npm基因表达量不断增加，可为受精后精子核解聚或体细胞核移植后体细胞编程做准备。之后通过原核表达载体的构建，纯化出核质蛋白并进行体细胞核移植，结果表明卵母细胞质中注射入外源核质蛋白或其结构类似物多聚谷氨酸（PGA），可显著提高体细胞核移植效率。本项目取得预期的研究结果，可更好地提高体细胞核移植和转基因的效率，并为今后研究Npm基因表达调控提供基础，项目实施过程中共培养研究生1名，本科生6名，发表论文2篇，接收论文1篇，发表会议论文摘要1篇。