基于干扰素相关TLRs信号通路的HH胶囊对HBV转基因小鼠抗HBV分子机制研究

乙肝病毒(HBV)感染属重大疾病，干扰素是一线抗HBV药。在国家"十一五"科技支撑计划等资助下研发并证实HH胶囊影响干扰素通路抗病毒蛋白而抗HBV，其与诱生干扰素有关，但机制不清。Toll样受体(TLRs)是免疫学研究热点，可诱生Ⅰ型干扰素,证实HH胶囊中丹参、虎杖等调节TLRs，灵芝诱生干扰素，故提出"调节干扰素生成相关TLRs信号通路是HH胶囊抗HBV机制之一，通路中存在抗HBV作用靶点"假说，本研究以HBV转基因小鼠为对象，用荧光定量PCR、Western Bloting等法,观察HH胶囊对小鼠HBV表面抗原（HBsAg）、HBV脱氧核糖核酸（HBVDNA）、HBV信使核糖核酸（HBV-mRNA）及对TLRs通路中TBK1、IRF3、IRF7等干扰素生成相关信号影响，证实其通过TLRs诱生干扰素，首次从TLRs通路角度揭示HH胶囊抗HBV分子机制，为抗HBV研究提供新思路和新靶点。

1、首先建立了虎黄方（HHF）的HPLC特征指纹图谱以实现对药物的质量控制。最终标定14个特征峰构成HHF的指纹图谱。确定其中1号峰为没食子酸、8号峰为柯里拉京、9号峰为虎杖苷、10号峰为鞣花酸、13号峰为甘草酸、14号峰为齐墩果酸。2、药效学研究：与模型组比较，高剂量HHF可显著降低HBV转基因小鼠肝组织HBsAg（11.98±0.85vs21.35±1.55）、HBVDNA（765625.00±287161.94vs1343000.00±278991.55）水平和血清HBsAg(9.93±2.28vs19.02±0.37)、HBVDNA(2276.38±.402.53vs19828.75±3874.08)水平（P＜0.01, P＜0.05），但高剂量HHF组与对照组（苦参素）之间疗效比较，二者无明显差异（P＞0.05）。3、机制研究：与模型组比较，高剂量组转基因小鼠体内的TLR3mRNA（2.75E-2±7.26E-3vs1.01E-2±1.88E-3）、TLR4mRNA（5.43E-2±3.08E-2vs2.10E-2±1.75E-2）、TKB1mRNA (5.21E-2±7.13E-3vs2.70E-2±6.94E-3)、IRF3mRNA (10.18E-2±4.55E-2vs4.64E-2±1.42E-2)、IRF7mRNA(6.39E-2±5.26E-2Vs2.62E-2±1.30E-2)显著升高（P＜0.05，P＜0.01）。高剂量组TLR3蛋白(2.03±0.81vs1.37±0.49)、TLR4蛋白(2.65±0.61vs1.93±0.30)、TBK1蛋白(2.24±0.67vs1.58±0.20)、IRF3蛋白(1.61±0.52vs0.80±0.21)、IRF7蛋白(1.59±0.38vs0.91±0.23)水平显著升高，差异具有统计学意义（P＜0.05 ，P＜0.01）。而低剂量组TLR3、TLR4、TKB1、IRF3、IRF7等mRNA、蛋白水平均无明显变化，差异无统计学意义（P＞0.05）。与高剂量组比较，低剂量组TLR3蛋白(2.03±0.81vs1.32±0.26)、IRF7蛋白(1.59±0.38vs0.78±±0.47)显著降低，差异具有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）.