香青兰总黄酮预处理抗心肌缺血再灌注损伤作用机制的研究

心肌缺血再灌注损伤（MIRI）是临床心脏病患者猝死的常见原因，寻找有效的防治措施具有重要的现实意义。中药预处理是防治MIRI的重要手段之一。前期研究显示，香青兰总黄酮抗心肌缺血作用确切，但是其药效学机制尚不明确。本研究依据前期研究结果，采用乳鼠心肌细胞缺氧-复氧及大鼠心肌缺血再灌注损伤的模型，针对MIRI的发生机制，从氧自由基损伤、中性粒细胞浸润、细胞凋亡、炎性因子释放、黏附因子表达、核转录因子调控等多个环节，从整体、细胞、蛋白质和分子水平上探讨香青兰总黄酮抗MIRI的作用机制，以期较深入、全面揭示香青兰总黄酮药理性预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的机制，切实反映其多环节、多途径、多靶点的作用特点，为其进一步深入开发及拓宽临床应用提供科学依据，为临床应用维药防治缺血再灌注损伤提供新的思路，为进一步发掘利用这一传统的维吾尔道地药材奠定理论基础。

心肌缺血再灌注损伤（MIRI）是临床心脏病患者猝死的常见原因，寻找有效的防治措施具有重要的现实意义。中药预处理是防治MIRI的重要手段之一。香青兰总黄酮（TFDM）抗心肌缺血作用确切，但药效学机制尚不明确。为此，本课题分别采用结扎大鼠左冠状动脉前降支（LAD）与原代培养的方法复制在体及细胞MIRI模型，进行如下研究：监测大鼠肢体Ⅱ导联心电图、HE染色法检测心肌组织病理形态学变化，TTC染色法测定心肌梗死程度、比色法测定血清心肌酶及氧化酶活性。检测心肌组织中Ca2+含量及能量代谢酶Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase的活性，测定血清中炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α及内皮舒缩因子ET-1、CGRP、TXA2、PGI2、NO水平及心肌细胞中磷酸化 IκB-α 、COX-2 和ICAM-1、PKCε及CD40/CD40L蛋白表达水平。测定金属蛋白酶MMP-2、TIMP-2 mRNA转录水平，心肌细胞凋亡率以及组织中Bcl-2和Bax、Cyt C、ANT-1、caspase-3的表达。结果，与模型组比较，TFDM组心肌纤维较为完整，呈束状分布，炎症细胞浸润不明显。能明显减轻大鼠心肌梗死程度，有效降低血清心肌酶活性，升高血清中抗氧化酶活性，降低XOD活性及MDA含量；对降低心肌组织中钙含量，显著提高Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性；能降低血清中炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α及内皮收缩因子ET-1和TXA2水平，提高内皮舒张因子CGRP和PGI2含量，同时对NO水平和NOS活力具有显著抑制作用；增强磷酸化 IκB-α及PKCε表达，降低COX－2、ICAM-1及CD40/CD40L蛋白表达水平；刺激TIMP-2 mRNA及MMP-2 mRNA表达，降低心肌细胞凋亡率，提高Bcl-2表达，降低Bax、ANT-1、caspase-3表达，Cyt C释放量明显减少。因此，TFDM通过抑制氧化损伤、纠正能量代谢障碍、抑制炎症因子、金属蛋白酶活化及中性粒细胞浸润，缓解内皮功能障碍、调控凋亡活性基因等机制，发挥抗MIRI作用。本项目全面而深入地揭示了TFDM预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制，为进一步开发及拓宽临床应用提供科学依据，为临床应用维药防治缺血再灌注损伤提供新思路，为进一步发掘利用这一传统的维吾尔道地药材奠定理论基础。