隐睾不育的分子机制和几个相关基因功能的研究

生殖细胞与支持细胞间的相互作用对精子发生起重要作用。热激可逆性影响睾丸支持细胞骨架连接分子、 血睾屏隙和某些上游转录因子,使细胞去分化,失去支持精子发生的功能。利用隐睾模型我们克隆到三个与精子发生相关的功能基因,tsNHE、Afaf和Ddc8。tsNHE抗体可降低受精率、顶体反应和精子活力。其DNA疫苗免疫雌鼠, 通过凝聚阴道精子，其受孕和产仔率明显降低;Afaf通过质膜－内吞体－顶体通路，与SNAP25相关基因参与顶体前颗粒融合和成熟精子的顶体反应。本申请拟进一步探讨热激如何通过引发支持细胞核转录因子,继而影响下游相关调控因子表达,导致支持细胞紧密连接分子可逆性改变和细胞去分化,影响精子发生的分子机制；构建tsNHE(Nhedc1)、Nhedc2和Afaf基因条件性敲除小鼠, 在体研究其对生育率、精子形态、顶体反应、运动与受精能力的影响,对一些相互作用的蛋白做更深入的阐释。

睾丸位於阴囊中，比体内低2-3℃。隐睾症患者不育，术后可恢复。我们建立了小鼠睾丸及Sertoli细胞43℃局部热浴模型，在体和离体条件下系统探讨了热可逆性诱发支持细胞功能去分化和精细胞凋亡的分子机制。发现热激通过Sertoli细胞Wt-1/AR转录因子,极性杂合体和TGF-bata信号通路, 诱发其紧密联接和粘附联接分子及BTB可逆性变化,影响精子发生。短時热激对精子发生的影响是可逆的和完全恢复的过程,为建立43℃睾丸局部避孕裤研发提供了理论依据; 我们构建了Gata4flox/flox, AMH-Cre GATA4和AR基因(SCARKO)条件性敲除小鼠模型,皆发现雄性不育, 睾丸呈现唯Sertoli细胞综合症。发现GATA4在维持SSCs干细胞庫中发挥关键调控功能;揭示了雄激素-AR通过调控EGF-EGF receptor旁分泌通路影响减数分裂。发掘了Nhedc1和Afaf几个潜在的男性避孕基因靶点，构建了Nhedc1flox/flox, Zp3-Cre条件敲除小鼠,敲除雄鼠的精子数目和形态正常，但精子运动能力下降，导致生育率显著减低（为正常的30%左右）。另一个家族成员NHEDC2与NHEDC1结构相似。现阶段正在构建NHEDC1与2的双敲除小鼠，希望双敲除雄鼠完全不育,为可能找到完全可行的避孕基因靶点,作最后确定,对Afaf基因(Equatorin)敲除小鼠表型分析表明, Afaf不参与精子顶体早期发生过程,但它参与顶体反应。因为发现它与snap25有交叉反应,难以用作避孕基因靶点。共发表论文8篇,已接受论文发表2篇;.待发表论文8篇。