Axin与隐睾发病的相关性及分子机制研究

隐睾是新生男婴最常见的出生缺陷，显著增加患儿不育和睾丸肿瘤的患病风险，其发生发展机制不明。睾丸引带的正常发育和适时的移行退化是睾丸下降过程中最重要的睾丸外因素。体轴发育抑制因子Axin作为多结构域、多功能支架蛋白在Wnt信号通路、应激反应蛋白激酶信号通路中发挥重要作用，参与胚胎发育、细胞凋亡、肿瘤形成等生理病理过程。我们的前期研究发现了单纯性隐睾患儿中Axin基因的突变，同时发现隐睾患者睾丸引带组织中Axin mRNA的表达相对正常睾丸引带降低，提示Axin可能在隐睾的发生发展中起重要作用。本研究拟从DNA遗传变异、mRNA和蛋白表达、蛋白亚细胞定位角度，深入研究Axin与隐睾发病的关系及其作用机理，并采用质粒转染使目的基因高表达及基因沉默技术，研究其对小鼠睾丸引带细胞凋亡/存活、增殖性及收缩性的影响，研究结果将有助于进一步明确隐睾发病机制，并开展相应的早期诊断及干预研究。

隐睾是新生男婴最常见的出生缺陷，显著增加患儿不育和睾丸肿瘤患病风险。其发生发展机制不明。本项目研究对Axin1基因三个Tag SNPs位点（Rs370681，RS1805105及Rs12921862），在245例隐睾患者及413例健康对照者中进行了群体遗传学研究，结果提示Rs370681，RS1805105在两组之间有统计学意义，表明Axin1基因与隐睾密切相关。采用变性高效液相色谱法（DHPLC）对Axin1基因进行了全面的突变筛查，在隐睾患者组中新发现Axin1基因突变位点：Axin1基因mRNA G744C杂合突变，导致Axin1蛋白赖氨酸248天冬酰胺突变。根据课题评审意见，去除课题中组织相关的研究内容。克隆Axin1基因后，构建了Axin1/pEGFP-C1野生型及Axin1 G744C/pEGFP-C1突变型重组表达质粒，分别转染人胚肾293细胞。课题组采用RT-PCR方法，检测转染细胞相关基因mRNA表达， 发现突变型质粒转染细胞CTNNB及CALCA基因表达显著下调，采用Western Blot方法检测相关蛋白表达发现CTNNB表达显著下降。本研究达到了预期目标：首次从群体遗传学研究、DNA遗传变异筛查及突变功能研究等多个角度证实Axin与隐睾的发生发展密切相关；在隐睾患者中新发现Axin1基因突变位点Axin1 G744C，该突变影响CTNNB及CALCA等基因表达。本项目研究的顺利完成，为隐睾发病机制研究、Axin1及相关基因的深入研究以及Axin1在隐睾中的转化应用研究等奠定了基础。