内分泌干扰物对水生无脊椎动物的生态毒理与机制研究

环境内分泌干扰物（EDCs）的潜在生态风险已引起全社会的广泛关注。本课题以揭示环境雌激素诱导水生无脊椎动物发生雌性化的生态毒理与机制为主要目标，综合运用环境毒理学、组织病理学和分子生物学等技术手段，系统调查我国海洋无脊椎动物发生雌性化现状，深入开展雌激素类物质对无脊椎动物的毒理学研究，揭示无脊椎动物发生雌性化的生态危害，并初步探索发生雌性化的潜在机制，为揭示环境雌激素对水生无脊椎动物的生态风险奠定理论基础。

课题以揭示EDCs干扰软体动物内分泌行为的生态危害和内在发生机制为目标，首先调查了野生软体动物性畸变的发生情况，发现野生四角蛤蜊雌性化发生率处于14~30%，并且性畸变的发生率与软体部组织中的壬基酚和双酚A残留水平具有线性关系（R2NP=0. 954）；而脉红螺雄性化发生率处于6.48~12.5%，并计算得出有机锡对脉红螺种群的风险商为0.024。在此基础上，发现软体动物（扇贝）内源性类固醇激素水平随性腺发育呈现周期性的变化规律，卵巢组织中性类固醇激素水平（ND ~ 2.45 ± 1.22（E1）, ND ~ 27.90 ± 4.23（E2）和ND ~ 2.38 ± 1.56 ng/g（T））明显高于精巢（ND~0.07 ± 0.10 ng/g w.w（E1）, ND ~ 3.10 ± 2.00 ng/g w.w（E2）, 和 ND ~ 2.67 ± 1.55 ng/g w.w （T））。为准确定量扇贝组织中的目标基因的表达水平，课题利用RefFinder软件分析了beta-actin等5个常用内参基因的表达水平，发现EF-l alpha的表达最为稳定，确定作为扇贝定量目标基因时的首选内参基因。.在上述研究结果基础上，课题构建了经外源雌激素处理栉孔扇贝和铜锈环棱螺的高通量转录组数据库，得到栉孔扇贝51 997条unigene序列、铜锈环棱螺41 869条unigene序列。与对照组相比，50和500 ng E2/L处理后的精巢组织中分别有16692条unigene、18686条unigene、消化腺组织中分别有10492条unigene、13186条unigene的表达水平显著升高，同时精巢组织中分别有10212条unigene、9409条unigene、消化腺组织中分别有10629条unigene、9463条unigene的表达水平显著降低。其中，经雌激素处理后GPCR98的表达水平不再检出。同样，与对照组相比，经雌激素处理10天后铜锈环棱螺肝组织中有8301条unigene的表达水平显著上升，有11184条unigene表达水平显著降低；精巢组织中则分别有8099条unigene的表达水平显著上升，有12329条unigene表达水平显著降低。其中，注释功能为雌激素受体信号通道的unigene在雌激素处理后其在肝组织和精巢组织中的表达水平均显著降低，而注释功能为