尿源性干细胞的来源分析及其用于尿道组织工程重建再生的研究

在组织工程构建物的研究中，种子细胞匮乏和增殖、分化能力的不足是限制组织工程移植物活性的主要问题之一，这种现象在泌尿系组织器官中的表现尤为突出，自体组织的不足导致了体外构建物活力的下降，尿液中能够分离培养出干细胞并用于泌尿系组织工程的构建是一种新颖的尝试，考虑到尿液来源的便捷性、经济性，以及从尿液中分离培养的干细胞体外证实具有一定的肌源性和尿路上皮源性分化的潜能，尿源性干细胞作为种子细胞用于泌尿系组织工程重建再生就具有很大的优势。但尿液性干细胞的来源和分化性能目前还不清楚，本课题试图探索尿源性干细胞的来源以及体外条件下如何提高该细胞的分化效率，探讨细胞分化的条件，从而为尿源性干细胞在组织工程中的应用提供实验基础。

本课题探讨尿源性干细胞的来源，通过分段收集上尿路和自然排尿新鲜样本，比较两者细胞在形态、增殖能力、表面抗原染色等方面的差异，原代培养中，尿液的细胞可以表现多种形态的外观，从染色结果看，细胞可能来自于膀胱脱落细胞可能性较大，部分细胞染色无特异性阳性表现，以现有的培养条件和分化条件看，此类细胞可能处于细胞分化的早期，因而在体外可以进一步增殖分化，能够保持较好的增殖能力，细胞在生长的过程中，通过改变体外的培养条件，细胞可以向不同的方向分化，如肌源性，尿路上皮源性，软骨源性，骨源性等等。通过改变不同的培养条件，尤其是对不同的分化方向，有针对性的改变培养条件，观察不同处理对于细胞分化的影响及效果。目前结果表明，尿源性分化是可行的，不同样本均可以有阳性表达，并且细胞可以保持较好的增殖活力。.本课题另外一个目的探讨尿源性干细胞在泌尿系组织再生重建中的作用，通过复合培养，将肌源性分化和尿源性分化的细胞分层种植到膀胱脱细胞基质，目前我们发现细胞在基质材料上生长良好，表现为强大的增殖活性，生长存活的细胞仍可具有相应的分化状态，但在实验中我们后期体内种植后发现，细胞转移至基质内部较困难，细胞转化的比率仍不够理想，因而如何提高细胞生长，改善基质的细胞相容性是下一步重要的工作。.从技术上讲，本课题进行到现在基本完成了课题当初设置的目标和指标，完成了细胞来源分析，体外分离、增殖和培养，以及细胞在体外的分化条件的建立，完成了细胞的种植和短期的体内实验，基本明确了尿源性干细胞在体外的生长、增殖、分化和衰老的过程，探索建立了细胞分化的条件，证实细胞可以作为一种干细胞用于泌尿系组织工程的重建。. 从研究的进度上看，尽管体外实验证实尿源性干细胞增殖活力有效，分化潜能突出，但实际中我们发现细胞的分化效率仍不满意，这种不足是由于细胞来源不同还是由于体外分化条件的不足造成的，目前我们无法回答，我们试图改变体外培养、分化条件，仍然无法有效提高细胞特异性表达的阳性率，下一步我们打算有针对性的进行分化培养，优化体外分化条件，试图通过改变培养、分化条件，提高细胞体外分化效率，保持细胞的增殖活性，为下一步细胞的组织工程移植物构建建立基础。