全人源抗BMI-1肿瘤自身抗体在鼻咽癌发生发展中作用机制的初步研究

肿瘤自身抗体在肿瘤发生发展中起着重要的作用，但其作用机制尚不明确。我们的前期研究发现，在鼻咽癌患者血清中存在肿瘤自身抗体，特别发现抗BMI-1肿瘤自身抗体与鼻咽癌临床分期密切相关，并随着鼻咽癌临床分期进程其含量升高,其作为鼻咽癌早期诊断标志物具有良好的特异性和敏感性。因此本研究拟在前期研究的基础上，首先采用单细胞微孔培养技术筛选分离分泌抗BMI-1抗体的B淋巴细胞，克隆抗BMI-1抗体基因，在真核细胞中表达，然后分离纯化全人源抗BMI-1鼻咽癌肿瘤自身抗体。随后将所获得的全人源抗BMI-1鼻咽癌肿瘤自身抗体作用于鼻咽癌细胞株，观察其对鼻咽癌细胞株生物学行为的影响。并构建鼻咽癌动物模型，模拟人体免疫系统微环境，观察其对鼻咽癌发生发展的影响。通过本研究，阐明抗BMI-1肿瘤自身抗体在鼻咽癌发生发展中的作用机制，为抗BMI-1自身抗体用于鼻咽癌的早期诊断及预后判断提供依据。

肿瘤自身抗体在肿瘤发生发展中起着重要的作用，但其作用机制尚不明确。我们的前期研究发现，在鼻咽癌患者血清中存在肿瘤自身抗体，特别发现抗BMI-1 肿瘤自身抗体与鼻咽癌临床分期密切相关，并随着鼻咽癌临床分期进程其含量升高,其作为鼻咽癌早期诊断标志物具有良好的特异性和敏感性。. 我们在前期研究的基础上，首先采用单细胞微孔培养技术从鼻咽癌患者外周血中分离了B淋巴细胞，筛选获得26株分泌抗BMI-1抗体的B淋巴细胞，分别扩增抗体轻链和重链，将原核表达载体导入大肠杆菌DH5а，进行原核表达，表达产物通过ELISA对其生物学活性进行鉴定，发现第11株B淋巴细胞分泌的抗体（B11）结合BMI-1的亲和力最强。. 随后构建全人源抗BMI-1 自身抗体真核表达载体，转染真核细胞HEK293细胞，筛选获得分泌B11抗体的HEK293细胞株后培养，收集上清，ELISA分析HEK293细胞分泌的B11能够很好地结合BMI-1抗原。将HEK293细胞培养48h后，收集上清分离纯化获得B11抗体，采用1:1~1:1000稀释后分别作用于鼻咽癌细胞株5-8F，培养24~72h，发现不同比例稀释的B11抗体均能促进5-8F的生长，与空白对照相比，加入的B11浓度越高，细胞凋亡越少，而趋化试验显示不同浓度的B11均能促进5-8F的迁移，且浓度越高，迁移率越高。以1:100稀释的B11与5-8F共同培养24~72h，RT-PCR检测发现survivin、bcl-2、bcl-XL等抗凋亡基因表达升高，而bax、Bik、Bad、bid等促凋亡基因表达下降。经B11抗体共同培养的5-8F细胞能有效地抵抗T淋巴细胞的杀伤作用，T淋巴细胞的杀伤效率下降了53.7%。. 鼻咽癌动物模型实验结果显示，注射了B11组的裸鼠生长速度明显快于对照组，且肿瘤的大小明显大于对照组，实验组小鼠的生存期为53.4±5.7天，明显低于对照组89.7±7.2天。实验组明显存在局部淋巴结转移，其淋巴结转移的个数为6.6±1.5，明显多余对照组1.3±0.2，实验组肿瘤组织周围存在明显炎性细胞浸润，主要表现为T淋巴细胞浸润。. 通过本课题研究，提示了肿瘤自身抗体在肿瘤发生发展中起着重要作用，有可能成为肿瘤生物治疗及预测的肿瘤标志物。