全人源抗EGFR治疗性抗体Ame55的抗肿瘤药理学机制研究

The epidermal growth factor receptor (EGFR) plays a crucial role in a variety of human tumors. EGFR is a effective molecular target against which monoclonal antibodies (mab) have been developed for cancer therapy. In this research, we have selected out a new mab with significant antitumor effect from phage-display antibody library named Ame55, which has a good potential for clinical. Ame55 has a new structure and pharmacokinetic characteristics compare with other mab drug such as C225 and HR3, which means Ame55 may have some new pharmacological mechanisms. In this study, we will investigate anti-tumor functions and Immunology cytotoxic functions of Ame55 on cellular and molecular biological levels, such as it's inhibit functions on tumor proliferation, apoptosis, invasion and migration and ADCC or CDC effect on tumor cells. We will also study at the receptor binding specificity and mechanisms, the EGFR tyrosine kinase inhibition activity of Ame55, and their effects on the downstream pathways. Our study will also reveal if there is a traffic pathway of the cell surface antibody-receptor complex to the endoplasmic reticulum and then localization to the nucleus, and if the complex attenuates from Ubiquitination-mediated degradation pathway, if there is a recycling of antibody onto cell surface. A comprehensive understanding of the Pharmacological mechanisms of Ame55 will be great useful to clinical application of this drug on tumor treatment.

表皮生长因子受体EGFR是多种恶性肿瘤有效的治疗靶标，具有巨大开发价值。抗EGFR治疗性抗体在临床上成功用于多种EGFR高表达肿瘤的治疗，但上市的3株抗体在临床上的治疗效果和毒副作用表现不同。报道指出，其毒副作用的发生与抗体的亲和力、结合位点及作用模式有关。本研究利用噬菌体抗体库技术筛选获得一株结构上全新的全人源抗EGFR抗体Ame55，前期研究表明其抑瘤效果确切，具有良好的成药潜质。初步实验表明，该分子的药效和药代与上市抗体相当，但结合特点与上市的爱必妥及尼莫株单抗不同，提示该抗体与受体分子可能具有更好的结合特异性和更低的毒副作用。本研究将从Ame55抗肿瘤生物学功能入手，深入了解该抗体分子的抑瘤功能、药理学特性和作用机制，为进一步优化抗体结构，扩展其肿瘤治疗的效果和方案提供依据。

表皮生长因子受体EGFR是多种恶性肿瘤有效治疗靶标，具有巨大开发价值。国外已上市抗体均具有亲和力过高产生的严重不良反应，而国内研发的低亲和力抗体具有药效和适应症局限。故本课题希望获得亲和力居中，药效良好，表位全新的全人源抗体分子，以期获得低毒有效以及新机制的可能。.. 本研究通过对本课题组前期利用噬菌体抗体库技术自主筛选获得的全新抗EGFR抗体Ame55进行了结合特异性和结合机制研究，对包括对肿瘤细胞增殖、凋亡、恶化、迁移、通路抑制等功能的体外细胞学机制研究，包括体内裸鼠荷瘤药效、通路抑制、内吞机制等体内抑瘤机制的研究，同时进行了食蟹猴冲击性急毒实验，揭示Ame55的抑瘤作用发挥的主要途径，及其较低亲和力和新表位带来的新的药理学特点。.. 通过一系列体内外抑瘤效果和机制研究，我们发现Ame55在较低亲和力的情况下却具有与高亲和力同类抗体相近的抑瘤能力，与本课题的立项预期相吻合，并确认其为具有进一步研发潜力的候选药物分子。进一步研究发现，其体外与体内抑瘤效果的具有明显的跳跃性提升，且该体内外药效的巨大差异仅以酪氨酸磷酸化信号通路的抑制增加并不能完全解释，同时发现该分子与已上市同类抗体相比，具有明显的肿瘤部位蓄积特点，并发现该特点与抗体低亲和力相关的组织穿透作用及ADCC效应相关；同时发现其与化药伊立替康联用时药效甚至比高亲和力抗体更佳，并在食蟹猴试验中表现出明显的低毒特性。.. 本研究充分证明老靶点的巨大开发潜力，抗体研发中注重适当亲和力和毒性的平衡而非更高亲和力的重要性，同时说明靶向性抗体类药物新的结合表位和分子结构可能带来全新的药效与抑瘤机制。高度蓄积带来的ADCC效应预期在后续的人体实验中将展现出更好的高效低毒特点。. .在本研究的基础上，以分子为亲本进一步进行成药性改进并获得了新的分子A1C1，在一系列稳定细胞株构建、中试工艺研究、临床前研究后，于2015年6月提交了临床研究申请，并于2016年9月获得了I类生物新药临床试验批件（批件号2016L09577）。号2016L09577）。