白介素6上调肾脏ENaC参与高血压发生

肾脏远曲小管和集合管的上皮细胞钠通道（ENaC）是肾脏调节水钠代谢的限速步骤，许多激素、细胞因子和化学物质可以上调ENaC的表达和活性，影响血容量，并参与血压调节。.已有研究证实炎症因子白介素6（IL-6）与高血压密切相关。我们前期实验发现IL-6可以上调ENaC在皮质集合管上皮细胞中的表达。由此本课题将深入研究IL-6上调ENaC在肾远曲小管上皮细胞膜上表达的作用及其机制，为其参与高血压发生提供理论和实验依据。.本研究运用PCR和蛋白印迹探讨参与IL-6上调ENaC的表达、转位和降解的信号通路；运用膜片钳技术验证IL-6对ENaC电流调控作用；采用IL-6基因敲除鼠观察高盐饮食下ENaC的表达及其在血压调控中的作用。旨在为防治高血压提供新靶点。

上皮细胞钠离子通道（Epithelial Sodium Channel，ENaC）表达在肾脏远曲小管和集合管腔面，特异性的允许钠离子由细胞外进入细胞内，从而调节体内的水钠代谢。由于远曲小管ENaC受到多种激素、细胞因子和化学物质的调节，因此远曲小管段钠离子的重吸收被认为是维持体内总Na+平衡、血容量稳定和血压水平的重要组成部分。ENaC蛋白结构的异常被发现是Liddle综合征盐敏感性高血压的病因。因此ENaC在原发性高血压中的作用越来越受到学者的重视。.目前认为ENaC如异常活化，可能通过增加血容量、细胞内钠离子浓度和血管平滑肌收缩性等途径升高外周血管阻力，升高血压。寻找能上调ENaC活性的信号分子并揭示其机制，将为阐明高血压的始发机制提供理论依据。现有研究表明IL6可能参与了高血压的发生发展。文献检索显示血压升高与IL6的浓度显著正相关。在预实验中，发现用IL6处理肾脏远曲小管和皮质集合管上皮细胞，可以上调ENaC在基因、蛋白水平。同时ENaC通道的电流也增加。本课题拟在此基础上，继续探讨IL6如何上调ENaC表达水平。文献检索显示Jak2/STAT3、Ras/MAPK、PI3 k/Akt、.NF-κB信号通路和Nedd4-2介导的泛素化可能参与这一过程。.结果如下：不同浓度IL6作用于肾脏M-1细胞12小时后，抑制αENaC的表达，但随着IL6浓度的增加抑制作用减弱；对βENaC的影响不大；对γENaC的影响表现在当IL6浓度为100ng/ml 时增加γENaC的表达。IL6对细胞膜上ENaC各亚单位的表达影响不大。分别抑制JAK2/STAT3和NF-κB信号通路不能抑制IL6导致γENaC的表达增加；分别抑制PI3K和p38 MAPK信号通路抑制了IL6导致的γENaC的表达增加。钠离子荧光指示剂实验显示各组细胞上ENaC通道的活性没有显著性差异。单纯高盐饮食不能升高白介素6基因敲除小鼠和对照小鼠的血压；切除单侧肾脏后给予DOCA能升高白介素6基因敲除小鼠和对照小鼠的血压，但两组之间没有显著性差异。各组小鼠尿钠含量没有显著性差异。.本研究通过细胞和动物模型实验显示IL6可能通过PI3K和p38 MAPK信号通路上调M-1细胞上γENaC表达，但对ENaC通道的活性影响不大。本实验中IL6上调ENaC的表达在高血压的发生发展中可能起辅助作用。