EB病毒感染和IgVH基因抗原决定区特征在B细胞淋巴瘤发病及恶性演进中的研究

淋巴瘤的诊断和治疗一直是困扰病理和临床的难点，我们在前期工作的基础上结合中国淋巴瘤的特点，通过PCR基因扫描、DNA序列分析及原位荧光杂交等方法分析EB病毒在B细胞淋巴瘤如DLBCL、MALT、SLL等各种亚型中的感染状态、及p53，bcl-2、c-myc等相关基因的表达和突变、IgVH基因重排、突变、片段使用的倾向性及抗原决定区的分子特征，及其与临床预后的相关性，发现并建立EBV相关的抗原或有中国区域特征的、与B细胞淋巴瘤发病、恶性演进及临床疗效判断或预后评价相关的其他监测标记，为淋巴瘤的预后和靶向治疗提供科学依据。

课题组成员对常见类型B-NHL包括DLBCL、MALT、FL等进行免疫组化分型分析，Genescan检测IgVH基因的克隆性重排，测序分析突变状况及其分子特征；同时以FISH检测BCL-2，BCL-6,Myc等基因遗传学特征；检测EB病毒感染及相关基因表达情况。结果发现：1.用FR3A/FR2A引物检测70例B-NHL的IgVH基因，克隆重排的阳性率分别为90.0%/54.3%；两种引物联合检测阳性率92.9%。其中17例DLBCL测序分析显示14例为单克隆重排，3例为双克隆重排，20个VH基因片段中其使用频率分别为：VH3：50 %，VH4：45%，VH2：5 %，均为突变型IgVH基因，突变频率为3.2～19.6％，平均9.2％。2.在35例DLBCL样本中IgH、BCL-2、BCL-6等基因断裂分别为62.9%，25.7%和2.9%，43%的病例发生了BCL-2的扩增。DLBCL中BCL-2基因易位发生率较国外低，可能与中国人群中non-GCB型占多数有关。PCR-GeneScan结合FISH技术检测淋巴瘤阳性率为81.8%，两种技术联合检测可提高淋巴瘤分子病理诊断的检出率，为分子病理诊断平台提供了优化的技术参数。3 重排活化基因（RAG）可通过RAG综合体识别和切断Bcl-2基因致 t（14，18）易位；可协同诱导激活型胞啶脱氨酶作用引起染色体易位；RAG2蛋白降解异常导致V(D)J 异常重排；而EB病毒感染导致RAG1/2基因的再表达，均促进淋巴瘤的发生。但RAG的表达在30例B-NHL中仅1例阳性。4.EB病毒通过其相关基因或蛋白产物如LMP1等与宿主BCL-2家族作用，通过影响和调节宿主的凋亡，发挥其溶解期和潜伏期的作用。15例DLBCL病例中EBER和LMP1阳性仅检测到1例（7%），在8例克隆重排阳性的DLBCL病例中，EBV均阴性；5.利用本项目相关技术完成一乳头状肾细胞癌（PRCC）的中国家系的分子遗传特征分析,发现该中国家系3例同胞姐妹PRCC患者存在MET基因16号外显子突变（V1110I）及17,7号染色体三倍体，其子女4人携带同一突变基因，有PRCC遗传倾向。.目前课题组成员已发表SCI论文1篇，国内1级期刊2篇；待发表论文3篇。研究成果参加会议交流15人次，资助硕士研究生4名，资助6名七年制医学生申请和完成浙江省大学生新苗项目2项。