原癌基因RON参与EB病毒感染的霍奇金淋巴瘤发病及其药靶效应

EB病毒的感染与霍奇金淋巴瘤（HL）的发病和预后有密切关系，但是其机制不甚清晰。原癌基因RON是一组具有独特生物学功能的受体型酪氨酸激酶，与多种肿瘤的发病和进展有关。我们最近研究表明，RON在EB病毒感染的HL中表达很高，而EB病毒可以通过某些途径激活RON。因此，本课题拟通过临床病理样本分析、细胞恶性转化实验、致瘤性的信息传导途径异常、RON靶向性抑制实验等方面，系统研究EB病毒激活RON的机制,以及RON及其变异体在EB病毒感染的HL发生发展中的作用。目的是阐明：①EB病毒激活RON的分子机制，以及RON及其变异体在EB病毒阳性的HL中的表达特征；②RON及其变异体介导HL细胞侵袭进展效应的特异性信息传导分子及其关键环节；③特异性RON单抗及在治疗EB病毒阳性的HL中的可行性及有效性。本课题原创性较强，对于阐明EB病毒致HL发病发展的机理研究以及RON在HL的靶向治疗奠定基础。

该项目研究RON在霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma, HL)组织的表达情况；探讨改变RON的表达对HL细胞株L428细胞增殖和凋亡的影响。用免疫组化检测HL组织芯片上RON的表达情况，并用原位杂交的方法检测EBER在组织芯片中的表达状况；采用共培养密切接触法，观察EBV感染刺激不同时间对L428细胞RON表达的影响；MTT法、流式细胞术检测MSP(2nmol/L)刺激和Zt/f2(2F2) (2nmol/L)抗体处理不同时间后对L428细胞增殖和凋亡的影响；Western Blotting检测MSP(2nmol/L)刺激L428细胞不同时间，RON的磷酸化和相关信号途径的癌性信息分子的活化情况；采用SPSS 13.0统计处理软件分析，以p<0.05作为有差别统计学意义。结果发现：(1)HL组织中RON表达的阳性率为47.86%（21/44），两组病理亚型间表达具有差异性（p=0.023）；HL组织中EBER的阳性率为59.09%（26/44），RON的表达与EBV感染存在正相关(rs = 0.324, p<0.05)； (2)EBV感染L428细胞株后RON的表达明显上调，并且与LMP1表达密切相关。(3) MSP能够激活L428细胞RON的磷酸化，引起下游信号分子的磷酸化和β-catenin表达增强，促进细胞的增殖作用；而单抗Zt/f2(2F2)对L428的作用则反之，通过抑制RON的表达，诱导细胞凋亡。（4）AKT和ERK信号通路抑制剂联合ZT/F2(2F2)，能交互抑制其他信号通路活化；提示AKT和ERK1/2途径在ZT/F2(2F2)抑制RON介导的信号通路中，可能起着关键作用。