儿童重症EB病毒感染的病毒基因变异和转录特征研究

Severe diseases associated with Epstein-Barr virus(EBV) infection in children mainly include chronic active EBV infection（CAEBV）and Epstein-Barr virus-associated hemophagocytic lymphohistiocytosis(EBV-HLH). The prognosis of CAEBV and EBV-HLH is poor with higher fatality rate. The pathogenesis of these two diseases is unclear now. Our previous works indicated that gene mutation in the promoter of BamHI fragment Z left frame 1(BZLF1) of EBV variants was correlated with the development of CAEBV and EBV-HLH. In terms of several important functional genes of EBV,there is no study on linkage analysis of multiple gene mutation of EBV variants in CAEBV and EBV-HLH. The impact of gene mutation of EBV variants in epitope of histocompatibility leukocyte antigen is also unclear. Few studies on transcriptional profiling of EBV variants in CAEBV and EBV-HLH were conducted. In this study, assays in molecular biology and bioinformatics will be used to research the gene mutation of EBV variants including latent membrane protein 1(LMP1), EBV nuclear antigen 1(EBNA1), BZLF1 and its promoter (Zp). The epitopes of histocompatibility leukocyte antigen of LMP1 and EBNA1 will be predicted on line. The transcriptional profiling of EBV including all latent genes and several lytic genes in CAEBV and EBV-HLH will also be investigated in this study. The results of this study will be helpful to investigate the relationship between gene mutation and the development of CAEBV and EBV-HLH, and to search for better therapies of CAEBV and EBV-HLH.

儿童重症EB病毒感染主要包括慢性活动性EB病毒感染和EB病毒相关噬血淋巴组织细胞增生症，二者均预后较差，病死率较高。本课题组的前期研究提示，EB病毒BZLF1基因启动区变异与儿童重症EB病毒感染的发生具有相关性。由于EB病毒具有多个重要的功能基因，目前还缺乏儿童重症EB病毒感染的多基因变异连锁分析，以及病毒基因变异对HLA限制性抗原表位影响的研究，也缺乏其病毒基因转录特征研究。本项目将在前期研究和病例积累的基础上，应用分子生物学技术和生物信息学方法，研究儿童重症EB病毒感染EB病毒变异株的LMP1、EBNA1、BZLF1及其启动区等多个功能基因的变异特征并进行连锁分析，预测分析EB病毒变异株的LMP1和EBNA1的HLA限制性抗原表位，探讨外周血淋巴细胞中EBV潜伏和裂解基因的转录表达特征。其结果将有助于明确EB病毒基因变异与儿童重症EB病毒感染发生的关系，为寻找更有效的治疗方法提供线索。

儿童EB病毒的分子流行病学资料很少，EB病毒不同基因型或变异株与儿童EB病毒感染临床表型的关系尚缺乏研究。课题对儿童EB病毒感染传染性单核细胞增多症（IM）、EB病毒相关噬血细胞性淋巴组织细胞增生症（EBV-HLH）、慢性活动性EB病毒感染（CAEBV）和淋巴瘤（包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤）等来源的EB病毒的LMP1基因、EBNA1基因、BZLF1基因及其启动区Zp、EBER基因及病毒白介素-10基因的基因多态性进行了研究，并探讨了不同亚型及变异株与临床表型的关系。.结果：1、China 1变异株为LMP1基因的优势变异株，其在IM，EBV-HLH和淋巴瘤中的检出率差异无统计学意义(P>0.05)。Del-LMP-1变异株和XhoI 缺失亚型在IM、EBV-HLH和淋巴瘤中的检出率差异无统计学意义（P > 0.05）。2、V-val亚型为EBNA1基因分型的优势亚型，其在IM，EBV-HLH和淋巴瘤中的检出率差异无统计学意义（P>0.05)。3、EBV-I型、EBNA1-Vvv1变异株和LMP1-China1变异株高度连锁，EBV-I/ EBNA1-Vvv1/ LMP1-China1 连锁的EBV基因型在IM、EBV-HLH和淋巴瘤中的检出率差异无统计学意义（P > 0.05）。4、BZLF1-A1为BZLF1基因的优势基因型。 BZLF1-A型第一内含子以3个29bp重复序列为主，而B型中以30bp重复序列为主（p = 0.000），且重复序列的个数波动于1-13个不等。共检测出Zp-P、Zp-V3、Zp-V4、Zp-V1四种Zp基因型。EBV-Ⅰ+BZLF1-A1与Zp分型中Zp-V3高度连锁(p = 0.000)；EBV-Ⅰ+BZLF1-B4与Zp-P高度连锁(p = 0.000)。5、EB-6m和B95.8分别是EBER基因和vIL-10基因分型中的优势基因型。不同vIL-10和EBER基因型在IM、EBV-HLH、CAEBV中的检出率无显著差异。.结论：1.儿童EBV感染流行株以EBV-Ⅰ型为主，Vvv1、 China1和BZLF1-A1分别是EBNA1、LMP1和BZLF1基因的优势变异株。 2. EB-6m和B95.8分别是EBER基因和vIL-10基因分型中的优势基因型。3.不同EBV亚型/变异株与EBV感染疾病临床表型间发现相关性。