PHF6基因突变在急性T淋巴细胞白血病发病中的作用及机制研究

The plant homeodomain finger 6 (PHF6) gene is located on Xq26- a new X-linked tumor suppressor gene. Several lines of evidence indicate that PHF6 gene is implicated in leukemogenesis. Recently, we identified the somatic PHF6 mutations in 5.4% pediatric and 18.6% adult T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) patients, respectively. Clustering of PHF6 mutations in the second PHD-like domain highlights a possible role for this region in tumor suppression by PHF6. Of note, our study demonstrated that PHF6 mutations were particularly prevalent in T-ALL patients harboring mutations of NOTCH1 and JAK1 and those with a SET-NUP214 rearrangement. In order to determine the role of PHF6 in the pathogenesis of T-ALL, we will adopt multiple in vivo and in vitro techniques, such as RT-PCR, RQ-PCR, western blot, gene transfection, RNA interference, and mouse models. This study will provide more details on the pathogenesis of PHF6 mutations in leukemia.

PHD锌指蛋白6（PHF6）基因位于Xq26，近年来的研究表明该基因可能是一种抑癌基因，有研究显示PHF6基因突变可能参与急性白血病的发生。本课题组前期研究发现：在5.4%的儿童及18.6%的成人急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）患者中检测到体细胞性PHF6基因突变，并且发现多种新的突变类型，突变位点主要累及PHF6基因的PHD2结构域，提示该结构域可能是PHF6基因的重要功能域。此外，我们还首次发现PHF6基因突变与NOTCH1、JAK1基因突变及SET-NUP214重排存在明显的相关性。目前关于PHF6基因在白血病中的研究较为少见，其致白血病机制尚未完全明确。本课题拟采用array-CGH、RQ-PCR、western blot、基因转染、RNA干扰及动物模型等手段，从体内外两方面研究PHF6基因突变的分子机理，将为阐明PHF6基因的致白血病机制、寻找新的治疗靶点提供理论和实验依据。

PHD锌指蛋白6（PHF6）基因编码PHD锌指DNA结合蛋白，发挥潜在的转录调节作用。在急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)和急性髓细胞白血病患者中可检测到PHF6基因突变，提示PHF6基因突变有可能参与急性白血病的发生。本课题组对T-ALL患者中PHF6基因突变发生率及其临床和实验室特征进行了分析总结，主要内容及研究结果如下：（1）收集了143例初诊T-ALL患者的骨髓样本及临床资料，18例（12.6%）检测到PHF6基因突变，突变集中发生于外显子8、9、10，以框移突变和无义突变为主。PHF6基因突变组患者与野生型组患者相比，具有以下特点：染色体以正常核型为主（P=0.020），乳酸脱氢酶水平更低（P=0.008），原始细胞计数更高（P=0.002），总生存期及无复发生存期明显降低（OS, P=0.021；RFS, P<0.001），以上结果提示PHF6基因突变与T-ALL患者的不良预后有一定相关性。（2）在T-ALL患者中PHF6基因突变与NOTCH1基因突变（P<0.001）、JAK1基因突变（P=0.003）及SET-NUP214融合基因（P<0.001）存在明显的相关性，提示它们有可能存在协同致白血病作用。（3）PHF6基因突变组与野生型组在PHF6基因表达水平上无明显差异。在T-ALL患者中PHF6的表达与UBF的表达水平呈正相关，与NuRD复合物中CHD4的表达水平呈正相关，而与RBPP4表达水平呈负相关，提示PHF6可能与UBF和NuRD复合物结合发挥致白血病作用。（4）成功构建PHF6基因稳定过表达细胞株NIH3T3和稳定低表达细胞株MOLT4，NIH3T3过表达PHF6野生型及突变体后较空载体组细胞增殖更快，而PHF6低表达的MOLT4细胞增殖较相应的空载体组细胞减慢，提示PHF6基因可能促进细胞的增殖。（5）通过对4例T-ALL患者全基因组测序结果的数据分析，筛选到25个新的基因突变，其中1例患者同时伴有X染色体上PHF6和SLITRK4基因突变，SLITRK4基因可能与X染色体失活有关，提示PHF6和SLITRK4可能在T-ALL的发生中共同发挥协同作用。这些研究结果为进一步阐述PHF6基因在T-ALL中的致白血病机制提供了重要线索。本课题组发表SCI论文2篇，核心期刊论文1篇，主要研究结果的文章正在准备完善中。