新型APC变构体构建及其对大鼠内毒素诱导ALI肺微血管内皮细胞的影响

APC（活化蛋白C）是一种具有抗凝、抗炎、细胞保护作用的多功能蛋白，为治疗ALI（急性肺损伤）最有希望的药物之一。然而2008年SSC指南并不推荐APC用于脓毒血症合并单一脏器功能衰竭治疗，同时APC也存在较高的出血风险，可能增加病死率。.本课题拟通过位置定向诱变技术对APC外表面环Lys193、Arg229与Arg230以及Gla功能区Asp35和Asp36 两组位点多种组合形式进行定向诱变，构建相应变构体。在对该类变构体的物理学及抗凝功能评价基础上，优选其中具有弱化抗凝功能的APC变构体，并对内毒素诱导ALI大鼠模型和肺微血管内皮细胞（PMVEC）进行干预，观察APC变构体对内毒素诱导ALI 炎症反应以及PMVEC的影响，筛选出具有弱化抗凝功能且保留抗炎、细胞保护等作用的新型APC变构体，从而为进一步推进新型APC变构体应用于内毒素诱导ALI提供理论依据。

本研究探讨了活化蛋白C诱导的抗凋亡活性同内质网应激之间关系，研究发现活化蛋白C可以诱导GRP78 和GSK-3β表达增加，并抑制内毒素诱导的HUVEC凋亡。钙抑制没有改变活化C蛋白的抗凋亡作用。GSK-3β-siRNA干预后可以减少活化蛋白C对内毒素诱导的HUVEC凋亡效率。总的来说，活化蛋白C诱导内质网应激，并通过GSK-3β抑制内毒素诱导的HUVEC凋亡。此外，我们通过基因合成的办法对APC外表面环Lys193、Arg229与Arg230以及Gla功能区Asp35和Asp36 两组位点多种组合形式进行位点突变，构建相应变构体。研究发现基因合成的野生型APC对内毒素诱导的肺微血管内皮细胞及内毒素诱导ALI大鼠模型具有保护作用。筛选出3K3A-APC，同野生型APC相比具有弱化抗凝功能但加强抗炎及细胞保护作用，为进一步推进新型APC变构体应用于内毒素诱导ALI提供理论依据。