青稞β-葡聚糖生物转化机制蛋白质组学研究

In this study, two Tibetan hulless barley varieties with contrasting β-glucan content will be investigated. Firstly, the dynamics of content and distribution of β-glucan in two Tibetan hulless barley varieties during germinating and kernel developmental will be localized with immunogold and quantitative chemical analysis, the metabolite of two Tibetan hulless barley varieties during germinating and kernel developmental will be analyzed by GC/MS technology also. Secondly, the expression of protein in β-glucan biotransformation will be analyzed by proteomic method, the function and metabolic pathways of differently expression proteins will be noted through GO database and KEGG database. Finally, the gene expression levels of the key proteins in β-glucan biotransformation will be verified by qRT-PCR experiment. A comprehensive analysis of β-glucan biotransformation mechanism in Tibetan hulless barley can be approached systematically through the protein level, metabolite level and gene level. A better understanding of β-glucan biotransformation mechanism and crop improvement will be of theoretical and practical importance.

本项目以β-葡聚糖含量具有显著差异的两种青稞为研究对象。首先利用免疫标记技术结合化学检测方法研究两种青稞种子发芽和籽粒形成过程β-葡聚糖含量变化与定位情况，并利用GC/MS等手段对青稞发芽过程β-葡聚糖的分解与籽粒形成过程β-葡聚糖的合成进行代谢产物研究。然后运用蛋白质组学方法研究不同β-葡聚糖含量品种间、青稞种子发芽过程β-葡聚糖的分解和籽粒形成过程β-葡聚糖的合成相关蛋白变化情况，定性、定量的分析表达具有显著差异的蛋白，并对其进行功能和代谢通路等生物信息学分析。最后选取与青稞β-葡聚糖生物转化途径相关的关键功能蛋白进行基因表达水平的qRT-PCR验证。通过对差异蛋白、代谢产物和基因表达的结合分析、相互验证，从整体角度把握青稞β-葡聚糖生物转化过程，揭示青稞β-葡聚糖的生物转化机制。这将为全面了解青稞β-葡聚糖的生物转化机制及通过基因工程选育性状优良、稳定性好的青稞奠定理论和实践基础。

本项目以β-葡聚糖含量具有显著差异的三种青稞为研究对象，利用TMT定量蛋白质组学方法解析三个品种间的差异蛋白，并利用PRM对关键差异蛋白进行验证，解析青稞不同品种间β-葡聚糖含量差异机制。以高β-葡聚糖含量的青稞品种1127为研究对象，进行种植实验，利用TMT定量蛋白质组学方法鉴定青稞籽粒形成过程β-葡聚糖生物合成过程的差异蛋白，并利用PRM对关键差异蛋白进行验证，利用qRT-PCR进行关键基因的验证，解析青稞β-葡聚糖生物合成机制。最后进行发芽实验，利用TMT定量蛋白质组学方法鉴定青稞发芽过程β-葡聚糖分解的差异蛋白，并利用PRM对关键差异蛋白进行验证，解析青稞β-葡聚糖生物分解机制。通过对差异蛋白、PRM验证和qRT-PCR验证，从整体角度把握青稞β-葡聚糖生物转化过程，揭示青稞β-葡聚糖的生物转化机制。这将为全面了解青稞β-葡聚糖的生物转化机制及通过基因工程选育性状优良、稳定性好的青稞奠定理论和实践基础。