酒酒球菌胁迫诱导抗冷冻干燥机制蛋白质组学研究

Oenococcus oeni strain with good acid, ethanol tolerance and resistance to freezing drying characteristics will be investigated by methods of proteomics and bioinformatics. In this study, the cytoplasmic proteins and membrane proteins of Oenococcus oeni will be harvested for proteomic analysis. We will compare the proteome profiles of freeze-dried Oenococcus oeni PSU-1 and Oenococcus oeni XZ-22 exposed to different stress shocks using 2-DE. Differentially expressed proteins will be identified by MALDI-TOF-MS analysis and its corresponding gene will be validated by qRT-PCR technique. Aiming to illuminate the stress-induced resistance to freeze-drying mechanism, we will classify the proteins and carry out functional enrichment, proteins interaction net and cluster analysis. A better understanding of the stress-induced resistance to freeze-drying mechanism will be useful in directional selection and transformation of the excellent industrial strains, and be of theory and practical importance in developing ready-to-use malolactic starter cultures with our own property right.

本项目利用蛋白质组学、基因组学及生物信息学研究技术和方法，以筛选自自然发酵葡萄酒的具有良好的耐酸、耐乙醇和抗冷冻干燥特性酒酒球菌菌株作为研究对象，分别建立酒酒球菌不同胁迫诱导后冻干菌体全蛋白和细胞膜蛋白双向电泳表达图谱，并与标准菌株冻干前后蛋白表达谱进行比较，通过图谱图像分析软件进行定性和定量分析，找出响应胁迫诱导抗冷冻干燥差异表达蛋白，再利用质谱技术和数据库检索以及生物信息学数据分析等，初步鉴定和判断出酒酒球菌响应胁迫诱导抗冷冻干燥相关蛋白及其相应基因的代谢调控，同时采用实时定量荧光qRT-PCR技术进行验证，结合多种生物信息学软件分析数据，系统探讨酒酒球菌胁迫诱导抗冷冻干燥机制。该项目的实施，对于从分子水平阐明酒酒球菌胁迫诱导抗冷冻干燥机制具有重要意义，为定向选育和改造优良工业菌株，开发拥有我国自主知识产权的直投式葡萄酒乳酸菌发酵制剂奠定基础。

本项目利用蛋白质组学、基因组学及生物信息学研究技术和方法，以筛选自自然发酵葡萄酒的具有良好的耐酸、耐乙醇和抗冷冻干燥特性酒酒球菌菌株作为研究对象，分别建立酒酒球菌不同胁迫诱导后冻干菌体全蛋白和细胞膜蛋白双向电泳表达图谱，通过图谱图像分析软件进行定性和定量分析，找出响应胁迫诱导抗冷冻干燥差异表达蛋白，共鉴定差异蛋白355个，再利用质谱技术和数据库检索以及生物信息学数据分析等，初步鉴定和判断出酒酒球菌响应胁迫诱导抗冷冻干燥相关蛋白及其相应基因的代谢调控，同时采用实时定量荧光qRT-PCR技术进行验证，结合GO 富集分析、KEGG蛋白功能注释和蛋白互作等多种生物信息学软件分析数据，系统探讨酒酒球菌胁迫诱导抗冷冻干燥机制。该项目的实施，对于从分子水平阐明酒酒球菌胁迫诱导抗冷冻干燥机制具有重要意义，为定向选育和改造优良工业菌株，开发拥有我国自主知识产权的直投式葡萄酒乳酸菌发酵制剂奠定基础。