瑶山润楠中抑制H5N1型高致病性禽流感病毒复制活性成分的发现与研究

前期研究基础已确证瑶山润楠乙醇提取物中存在能够抑制H5N1型高致病性禽流感病毒复制的活性成分，同时还发现其中存在微量新型葫芦烷三萜活性成分。本项目首先拟通过活性跟踪，运用组合闪式色谱、HPLC-MS和HPLC-NMR等快速分离和结构鉴定技术，从已锁定的活性部位中，分离富集具有抑制H5N1型高致病性禽流感病毒复制的目标活性化合物，研究其结构及活性的特点；其次，以活性化合物的生源合成分析为指导，以其中的主要成分为原料，半合成微量活性成分及其衍生物，结合活性测定，研究构效关系。该项目在抗H5N1型高致病性禽流感病毒新型活性成分的结构、生物活性特点、生源合成为指导的半合成和衍生物制备以及构效关系等研究方面，有源头创新学术价值。可为新型抗H5N1型高致病性禽流感病毒感染提供源头创新的活性模板结构或先导化合物。

以活性跟踪为导向，一方面继续深入研究瑶山润楠乙醇提取物中具有抑制显著H5N1型高致病性禽流感病毒复制的活性成分，并以获得较大量的活性化合物的衍生物为母体结构，通过简捷的化学方法，半合成目标活性化合物及其衍生物，同时对它们在H5N1型高致病性禽流感病毒和其他相关病毒的活性进行评价。另一方面，对瑶山润楠乙醇提取物的不同分离部位，根据瑶山润楠的传统功效，进行抗炎、肝保护和神经保护等药理活性筛选，利用多种现代色谱技术，从活性部位获得的单体化合物并进行活性评价。结果表明，从瑶山润楠中共分离鉴定了117个化合物，除了分离得到的11个与抑制H5N1型高致病性禽流感病毒化合物10的相同骨架葫芦烷三萜外，还分离得到了20个达玛烷型三萜皂苷，2个罕见的新颖骨架化合物machiyaoshanolides A (33) 和B (34)，以及系列丁内酯、木脂素、黄酮类和其他类化合物。在结构鉴定方面，利用现代波谱方法、计算ECD和化学沟通方法，准确确定了新化合物包括新颖骨架的绝对构型，同时总结并验证用偶合常数J23a,24和J23b,24 值确定葫芦烷-22-酮-24-醇三萜侧链C-24构型的规律，解决了1957年以来国内外文献中10个相关化合物C-24构型的遗留、错误和混乱问题。在活性评价上，发现部分葫芦烷三萜皂苷和达玛烷型三萜皂苷具有明显的抗流感病毒活性和抑制α-葡萄糖苷酶的活性；部分木脂素类化合物具有明显的抑制Fe2-Cys诱导的大鼠肝微粒体中丙二醛(MDA)生成的活性和小鼠腹腔巨噬细胞TNF-分泌抑制活；另外，还发现1个木脂素化合物具有一定的抑制HIV-1复制的活性。最后，在对目标活性化合物衍生物合成方面，以含量较大的化合物9和11为起始原料，通过简单的酶水解、酯化，还原等方法，合成得到其衍生物12个，在抑制H5N1型高致病性禽流感病毒复制的活性测试上，除化合物10外，其他化合物及合成衍生物均未显示出明显的活性。以上研究结果基本达到了项目申请的预期目标，特别是新骨架化合物，以及抗病毒、抗炎、肝保护、神经保护活性化合物的发现，为创新药物研究提供有重要研究价值的活性模板结构或先导化合物。共发表研究论文7篇，其中SCI论文4篇，3篇发表本领域1区期刊上，最高影响因子为6.142。协助培养研究生2名。协助课题负责人获得副研究员和硕士研究生导师资格，以及获得北京市优秀人才和协和新星荣誉称号。