人乳头瘤病毒蛋白对人表皮朗格汉斯细胞免疫功能的影响

尖锐湿疣顽固难治，原因在于皮损局部细胞免疫的下调，关键是表皮朗格汉斯细胞(langerhan's cell, LC)免疫功能的受损。本课题在既往研究基础上，一方面研究人乳头瘤病毒HPV重要蛋白E7或病毒样颗粒VLP对LC增殖、分化、形态、功能包括趋化因子受体CCR6及CXCR4表达、LC迁移能力及对T细胞活化能力等的影响；另一方面研究HPV感染的角质形成细胞(keratinocyte, KC)对LC免疫功能的间接影响。此外，我们还分析LC或KC经病毒蛋白刺激后Toll样受体(toll-like receptor,TLR)的表达改变及信号通路的活化等，以及TLR活化对LC及KC表达趋化因子/趋化因子受体的影响和对LC迁移功能的影响，以揭示TLR在尖锐湿疣发生发展中的作用，以期为尖锐湿疣及其它HPV感染性疾病的控制提供实验室基础。

背景 研究低危型HPV感染机制对有效控制尖锐湿疣(CA)具有重要意义。本课题研究低危型HPV病毒E7蛋白对朗格汉斯细胞(LC)及角质形成细胞(KC) TLR信号通路的调控作用及免疫调控作用，以了解其在HPV病毒感染中的作用。方法 以HPV6b E7及各TLR激动剂刺激正常人KC 48小时后收获细胞，定量PCR检测TLR1-10及趋化因子CCL20的表达。诱导人外周血单核细胞分化为LC，上述刺激后PCR检测TLR及趋化因子受体CCR6和CXCR4的表达，ELISA检测IL12的表达，WB检测钙粘蛋白E-cadherin及TLR信号通路分子的表达及磷酸化水平。 结果 (1) HPV 6b E7蛋白下调KC TLR4、9基因的表达，上调TLR1基因的表达，明显下调CCL20基因的表达，各TLR激动剂无法逆转其下调；(2)HPV 6b E7蛋白刺激后LC细胞TLR3、4、10基因表达下调，TLR9、CXCR4和CCR6基因表达明显上调，TLR3/7/8/9蛋白的表达无明显改变；(3)、HPV 6b /11 E7蛋白刺激明显下调钙粘蛋白的表达，不影响LC分泌细胞因子IL-12；(4) LC经HPV 6b /11 E7蛋白刺激后，IRAK1蛋白表达显著下调， TLR激动剂刺激不能逆转其下调。HPV E7蛋白刺激或HPV E7蛋白联合TLR激动剂刺激细胞TRAF6、MyD88、IRAK4、IRF3、IRF7蛋白表达及IRAK4、IRF3、IRF7蛋白磷酸化水平无明显统计学差异。PCR结果则提示单纯HPVE7蛋白组IRAK1基因mRNA的表达略低于空白对照组。结论 (1)低危型HPV E7蛋白改变KC与LC TLR基因的表达，而TLR蛋白的表达无改变，可能涉及泛素及泛素酶的作用；(2)低危型HPV E7蛋白可上调LC表达CCR6及CXCR4，但其同时下调KC表达CCL20，由此认为CA的LC数量减少与KC表达CCL20的下调更相关；(3)低危型HPV E7蛋白可能通过下调LC钙粘蛋白表达以减少表皮LC滞留从而降低局部免疫；咪喹莫特显著上调LC钙粘蛋白表达，可能促进表皮内LC的滞留来上调局部免疫；(4)低危型HPV E7蛋白不促进LC分泌细胞因子IL12，部分TLR激动剂可上调IL12的分泌；(5)低危型HPV E7蛋白可通过干扰IRAK1蛋白分子的表达干扰TLR信号通路。