从miRNA表达谱研究抗纤灵方抑制肾脏纤维化的作用和机制

Renal fibrosis is the basic pathological change in the development process of all kinds of kidney diseases including renal interstitial fibrosis and glomerular sclerosis,and the final pathway of end-stage renal failure .TGF-? and its mediated Smads signaling pathway is an important mechanism of renal fibrosis.At present, found that miRNA play an important role in renal fibrosis,which may by regulating target gene TGF-? signaling inhibits renal fibrosis process. The mechanism of renal fibrosis may provide a new therapeutic target .Chronic renal fibrosis pathogenesis of qi stagnation and blood stasis, blood stasis blocking collaterals .In the years of study confirmed Kangqianling in improving played a very good role in renal fibrosis.On this basis, we propose Kangqianling prevention of renal fibrosis mechanism may be regulated by taking miRNA as the core mechanism mediated TGF-?/Smads pathway of the hypothesis. Based on the adriamycin induced nephropathy rats,Losartan Potassium as control group,we select of miRNA in ordor to find relevant fibrosis target gene.From the gene, cell, the overall level, studying the mechanism of miRNA and the related regulation of target gene regulation on the renal fibrosis.At the same time ，it is reavealed the effect mechanism and effect of Kangxianling Decoction regulation of miRNA and its related genes.The reserch will provide the important basis for applying kangxianling Decoction,removing blood stasis control of renal fibrosis.

肾脏纤维化（包括肾间质纤维化和肾小球硬化）是各种肾脏疾病发展中的基本病理改变，也是终末期肾衰最终共同通路。TGF-β及其介导的Smads信号通路是肾脏纤维化其中重要机制之一。目前发现miRNA在肾脏纤维化中起重要调控作用，其中可能通过调节靶基因TGF-β信号通路抑制纤维化过程，这一机制为治疗肾脏纤维化提供新靶点。慢性肾脏纤维化病机气滞血瘀，淤血阻络。在多年研究中证实抗纤灵方通过活血化瘀在改善肾脏纤维化方面起很好作用，在此基础上我们提出抗纤灵方防治肾脏纤维化机制可能通过调控以miRNA为核心机制介导的TGF-β/Smads信号通路的有关假说。在以阿霉素肾病大鼠模型基础上，以科素亚为对照组，筛选相关miRNA及其靶基因，从基因，细胞，整体水平研究中药调控miRNA及其靶基因TGF-β信号通路，为抗纤灵方活血化瘀防治肾脏纤维化提供科学依据。

肾脏纤维化是各种慢性肾脏病发展中的基本病理改变，也是终末期肾衰最终共同通路，其中TGF-β/Smad信号通路是介导肾脏纤维化发生发展的主要机制。中药活血化瘀方抗纤灵方前期临床和实验研究中证实能改善肾脏纤维化。本研究通过阿霉素肾病肾纤维化模型，利用高通量RNA测序技术筛选相关miRNA差异表达谱，通过生物信息学分析预测差异miRNA及其靶基因，并进一步通过体内，体外实验明确相关差异非编码RNA的下游信号分子的变化，阐述抗纤灵方改善肾纤维的调控机制。研究结果显示，抗纤灵方通过调节TGF-β/Smad信号通路，使TGF-β1、Smad3、Col1a1、Col1a2、FN和a-SMA的基因表达量的改变，使大鼠模型的蛋白尿和肾功能得到明显的改善，在肾组织病理变化中得到验证。通过高通量miRNA测序技术显示，正常对照组与模型组基因表达差别最大，正常对照组与高剂量治疗组基因表达差别最为接近，提示高剂量的抗纤灵治疗可以逆转模型组纤维化，向正常对照组发展。从差异表达分析中，我们观察到了药物处理剂量越大，样本的表达谱越与对照组最为相近，表明抗纤灵方随着剂量增大抗纤维化的效果越好。进一步的miRNA的DEG分析显示，miR-15b、miR-21、miR-6216等在纤维化模型组中上调，药物治疗后下调，miR-107在纤维化模组中下调，药物治疗后上调，这些miRNA可能在抗纤灵方抑制肾纤维化进程中发挥重要作用。通过生信分析，我们找到潜在的抗纤灵方治疗相关的miR-15b基因，利用负调控网络筛选出miRNA相关潜在的靶基因，发现包括Smad7、Gapt、Tmlhe等基因的改变。信号通路分析显示，纤维化和抗纤维化过程主要参与的通路有TGF-β通路,Wnt通路等。并通过细胞增殖实验干扰miR-15b的表达回复验证，抗纤灵治疗组细胞中Smad3、Col1a1、TGF-β、a-SMA基因表达均有明显降低，且随着抗纤灵用药剂量的增加，呈剂量效应关系。本研究将有助于揭示肾脏纤维化中相关miRNA，靶基因及其作用的信号通路调控机制，为研制防治肾脏纤维化及相关中药复方治疗提供科学依据。