NADPH氧化酶源性活性氧介导Siglec8/F诱导嗜酸性粒细胞凋亡机制的研究

选择性表达于人嗜酸粒细胞表面的Siglec-8，具有特异诱导嗜酸粒细胞凋亡的作用。经IL-5预处理的嗜酸粒细胞，对Siglec-8抗体交联诱导的凋亡，反应更加快速、敏感，机制尚不清楚。我们发现，IL-5预处理后，Siglec-8抗体交联快速诱导嗜酸粒细胞内ROS产生，ROS产生量与细胞凋亡水平密切相关。结合文献报道，IL-5能提高p47phox磷酸化水平，活化NADPH氧化酶产生ROS。我们假设IL-5可能加强Siglec-8抗体交联诱导p47phox磷酸化，激活NADPH氧化酶产生ROS，继而ROS快速参与诱导人嗜酸粒细胞凋亡反应。鉴于小鼠Siglec-F是人类Siglec-8的功能类似物，本项目拟借助RNAi技术及基因敲除小鼠模型，深入研究ROS在Siglec-8/F抗体交联诱导嗜酸粒细胞凋亡中的作用，以期为探索哮喘等嗜酸粒细胞异常增多疾病新的治疗靶标提供有价值的理论基础。

三年间，按照计划书完成了主要研究内容。主要的研究结果如下： .1. 经IL-5预处理的人嗜酸性粒细胞，其对Siglec-8抗体交联诱导的凋亡反应更加敏感，表现为凋亡事件发生更早、更快速；Siglec-8抗体交联后1小时，嗜酸性粒细胞内活性氧（ROS）产生量显著增加。上述结果提示ROS的大量生成释放是决定Siglec-8抗体交联诱导嗜酸性粒细胞凋亡的关键因素。.2. 我们研究发现NADPH氧化酶抑制剂DPI能阻断Siglec-8介导的凋亡效应，提示NADPH氧化酶源性ROS是Siglec-8介导凋亡信号途径中的关键分子。NADPH氧化酶活化过程中，磷酸化p47phox首先从胞浆溶质转位至细胞膜激活其它配体完成活化过程，我们研究中发现Siglec-8介导凋亡过程中，胞浆溶质磷酸化p47phox水平显著下降，而与此同时ROS的生成却大量增加，我们推测，在此过程中p47phox蛋白的产生量并没有增加，某些始动因素可能促使磷酸化p47phox快速转位至质膜活化NADPH氧化酶，以至短期内ROS大量生成、释放，参与诱导凋亡效应。.3. Siglec-F抗体交联诱导小鼠嗜酸性粒细胞凋亡过程中ROS的产生量并无显著变化。尽管如此，仍不能排除ROS参与Siglec-F抗体交联诱导嗜酸性粒细胞凋亡过程的可能，我们选用DPI与apocynin两种NADPH氧化酶抑制剂及antimycin线粒体呼吸链抑制剂，以进一步探讨是否ROS参与调控Siglec-F抗体交联诱导的凋亡效应。结果表明DPI、apocynin、antimycin均不能阻断Siglec-F抗体交联诱导的小鼠嗜酸粒细胞凋亡效应；DPI或antimycin单独亦可诱导小鼠嗜酸粒细胞凋亡。.综合上述研究结果，我们认为Siglec-F抗体交联诱导的凋亡反应可能不需要NADPH氧化酶源性ROS。小鼠Siglec-F与人Siglec-8诱导嗜酸粒细胞凋亡的机制不同。有关Siglec-F介导小鼠嗜酸粒细胞凋亡的研究无法为人类Siglec-8诱导嗜酸粒细胞凋亡机制提供合理的参考。.主要成果：.发表SCI收录文章2篇，核心期刊收录文章2篇；培养硕士研究生两名。