血浆miR-126：一种新的评价动脉粥样硬化早期内皮损伤标志物的研究

内皮损伤是动脉粥样硬化（AS）的始动过程和共同通路，寻找敏感特异的内皮受损分子标志物有助于AS早期筛查。MiRNAs新近被发现以某种形式稳定存在于血浆中，具有分子标志物的特征。我们证明血浆中的miR-126几乎完全来源于内皮细胞，并且在AS患者血浆中的含量明显高于健康对照，在血压不同的大鼠的血浆含量也存在差异，我们猜测血浆内皮细胞特异来源的miRNA能反映内皮损伤程度，在AS早期内皮损伤阶段就能区分AS高危人群，其中血浆miR-126是一个理想的候选标志物。我们拟运用miRNA芯片、定量PCR、免疫印迹、病理染色、流式细胞术等方法，从血浆内皮特异miRs的角度出发，结合血浆miRs芯片，在内皮损伤的细胞模型、AS动物模型，以及临床AS患者中全面分析血浆内皮特异miRs作为AS早期内皮损伤阶段的新的血浆分子标志物，并初步探讨其存在形式，期待发现一种全新的AS早期筛查的分子标志物。

本项目总体而言执行顺利，但该项目属于前言热点，在我们进行实验的过程中，不断有类似的研究发表，某些数据已经部分涉及我们的研究内容及预期结果，为了维持课题的新颖性，我们一方面注意完成原定计划，也不断对进行适当调整。课题可以分为3个部分：首先，根据进度，在2011-2012年度，我们建立了循环血miRNA定量分析平台，在此平台基础之上，采用RNA抽提、定量PCR、microRNA array等多种方式，对血浆中、内皮细胞中、心肌细胞中、骨骼肌细胞中的microRNA的分布及相关性进行了分析，圈定了miR-126为主的11个miRNA（miR-126、-21、let-7a、miR-222、-23a、-221、-125b、-26a、-29a、-16和-100）作为候选标志物；其后利用动脉粥样硬化的大鼠模型、糖尿病大鼠模型对内皮细胞高表达的miRNAs在受到高脂、高糖不同动脉粥样硬化的危险因素刺激下，血浆中miRNA的含量进行了分析，发现高血脂引起血管内皮损伤时，大鼠血浆中miR-126、let-7a、miR-21和miR-26a的水平明显升高，miR-29a的水平明显降低。高血糖引起血管内皮损伤时血浆中miR-126、miR-21和miR-221的水平出现了明显的升高，miR-16和miR-23a的水平明显降低。其中miR-126和miR-21作为进一步筛查，在2013年，利用miRNA芯片，以及动物实验的结果，我们对动脉粥样硬化的患者血浆中可能的作为标志物的部分miRNA含量进行了比对，发现人体数据并不稳定，因此在进一步扩大样本。同时对血小板活化的血浆microRNA标志物进行了初步尝试研究，发现血小板高表达的microRNA可能在此过程中，可能影响实验结果，例如miR-223，有望血小板活化的指标。在此过程中，我们发现动脉粥样硬化形成的过程中，炎症免疫相关的miR-155明显的增高，因此我们对炎症相关的miR-155在冠心病患者血浆中的表达量进行了测定，并对miR-155调控巨噬细胞吞嗤Ox-LDL的机制进行了深入探讨，在此方面取得了突破，阐明了miR-155作用于单核巨噬细胞调控动脉粥样硬化形成的机制。同时，通过超速离心，直接观察到了微泡，为其功能研究奠定了基础。项目执行期间，发表期刊论文6篇，包括1篇标注基金资助的SCI论文，会议论文3篇，发明专1项。