糖基转移酶Glt25D1/D2：肝纤维化药物干预的新靶点？

本研究旨在利用动物模型、细胞模型及分子克隆技术，系统观察胶原特异性O-糖基化修饰对胶原合成及分泌的影响。（1）大鼠模型，观察O-糖基化修饰抑制剂对大鼠肝纤维化进程的影响、及催化胶原O-糖基化修饰的糖基转移酶Glt25D1/D2表达变化规律。（2）观察O-糖基化抑制剂Benzyl-α-GalNAc对TGF-β1诱导大鼠肝星状细胞系HSC-T6胶原合成及分泌的影响。（3）利用RNAi技术观察下调Glt25D1/D2表达对TGF-β1诱导HSC-T6胶原合成及分泌的影响。（4）利用可诱导高表达质粒pNI2，观察诱导高表达Glt25D1/D2对TGF-β1诱导HSC-T6胶原合成及分泌的影响。（5）利用免疫共沉淀技术、哺乳类动物双杂交技术，以及Biacore体外分子相互作用研究系统，阐述Glt25D1/D2内质网可能的功能相关蛋白。以期明确干预胶原O-糖基化修饰对胶原合成及纤维化进程可能的影响。

本研究旨在利用动物模型、细胞模型及分子克隆技术，系统观察胶原特异性O-糖基化修饰对胶原合成及分泌的影响。通过课题实施，我们获得如下结果：（1）O-糖基化修饰抑制剂（Benzyl-α-GalNAc）能剂量依赖性地抑制人肝星状细胞（LX-2）生长，其机制可能是诱导细胞凋亡；2) Benzyl-α-GalNAc抑制LX-2细胞胶原蛋白表达；（3）O-糖基转移酶Glt25D1/D2对LX-2细胞的胶原表达无显著影响；（5）Glt25D1/D2与内质网应激蛋白无明显的相互作用；（6）动物实验结果证实Benzyl-α-GalNAc能够部分抑制肝纤维化进程，但在肝纤维化过程中Glt25D1/D2并无明显的表达规律。根据以上结果，我们认为抑制O-糖基化修饰能部分抑制肝纤维过程中胶原表达。但O-糖基转移酶Glt25D1/D2却对胶原表达无显著影响。由于O-糖基化修饰抑制剂具有广谱抑制作用，不能作为抗肝纤维化的有效药物，因此我们需要继续寻找有效的抗肝纤维化的O-糖基转移酶。