乳腺不典型增生疾病与线粒体DNA突变的相关性研究

The Mitochondrial DNA（mtDNA） of tumorous tissue、normal breast tissue and peripheral blood in 100 benign breast disease and complicated with severe atypical hyperplasia patients who come from Kunming, Yunnan Province were extracted respectively. The mtDNA whole genome was amplified into two overlapping segments by polymerase chain reaction (PCR), which were then sequenced respectively by using inner primers. Variants of each mtDNA genome were recorded according to the revised Cambridge reference sequence. The private variation (of each tumor tissue) was pinpointed by means of phylogenetic tree reconstruction, which was then screened in the mtDNA from the matched peripheral blood, with especial attention to verify whether the distilled variation is private to the patient or infact specific to the tumor issue. By age group,these somatic mutations will be analysis by compared with the somatic mutations in breast cancer which is the previous study at home and abroad.In order to search the key factor in the process form benign breast disease and complicated with severe atypical hyperplasia to breast cancer,given a multivariate analysis with the risk factors like family history，smoking,menstrual history and breast disease history,etc., These can provide a strong basis for program development of clinical early diagnosis and treatment of precancerous lesions of breast cancer..

本课题拟对来自云南昆明的100例乳腺良性肿瘤伴重度不典型增生患者的肿瘤组织、正常乳腺组织及外周血的线粒体DNA(mtDNA)进行聚合酶链反应全基因组内引物扩增及DNA测序，以修订过的剑桥标准序列为标准比对并记录突变位点，参照东亚线粒体DNA系统发育树来确定其系统发育地位;通过单倍型类群划分并与前期发表的mtDNA全基因组数据比较，识别出个体特有的变异及单倍型类群特征变异;通过与同一病患个体外周血mtDNA变异模式比较其突变分布差异，揭示可能存在的乳腺良性肿瘤伴重度不典型增生组织特有的体细胞突变。将所筛选出的体细胞突变在样本年龄的分组下，与国内外前期研究的乳腺癌样本的mtDNA突变结果进行对比分析，同时将遗传因素、吸烟、初潮、孕产等作为危险因素进行多因素分析，寻求乳腺良性肿瘤伴重度不典型增生进展到乳腺癌过程中起关键作用的因素，为临床的早期诊断和癌前病变的治疗方案制定提供有力的依据。

线粒体DNA（mtDNA）突变与癌症相关性正日益受到广泛的关注。乳腺癌目前已成为威胁女性健康与生命的最常见恶性肿瘤之一，但病因至今仍不明确，目前公认的乳腺癌发病机制为“多阶段发展模式学说”，即乳腺组织从正常→一般增生→非典型增生→原位癌→浸润癌，在某些因素作用下，可由量变至质变，转化为恶性肿瘤。因此对癌前病变即乳腺非典型增生阶段采取干预治疗手段,可以有效减少乳腺癌的发生率。探讨乳腺不典型增生与乳腺癌相关危险因素，进一步查找乳腺不典型增生进展到乳腺癌过程中起关键作用的因素，并结合mtDNA的体细胞突变进行研究，为乳腺癌的早期诊断和预防提供临床及基因学依据。选取2013年1月至2014年10月期间收治在昆明市第一人民医院乳腺科组织病理学诊断为乳腺非典型增生患者（111例）作为病例组，同期诊断为原发乳腺癌患者（156例）作为对照组，采用SPSS19.0软件进行logistic回归分析探讨乳腺非典型增生发展至乳腺癌的相关危险因素。选取2013年1月-2016年12月期间收治于昆明医科大学附属甘美医院乳腺科组织病理学诊断为乳腺非典型增生患者79例，每个患者知情同意后分别取肿瘤组织及外周血。利用传统的苯酚氯仿法对乳腺肿瘤患者的肿瘤组织及外周血进行总DNA的提取。对所提取DNA进行PCR扩增和DNA全基因组测序。利用PCR法测定病变组织线粒体DNA的全序列，经过标准序列测定后测定其突变位点数，根据我国人群线粒体DNA单倍类型分布进行划分；79例患者中，7个出现体细胞突变。其中，28例乳腺纤维瘤并非典型增生未见体细胞突变，27例乳腺囊肿并非典型增生发现2个体细胞突变，26个乳腺增生症并非典型增生发生5个体细胞突变。79例患者中其突变位点分别位于7861、9089、9910、10163、13369、14906和16093。患者年龄、绝经与否及流产次数在乳腺非典型增生发展至乳腺癌过程中可能扮演重要角色，因此可在这些方面采取预防措施。线粒体DNA突变在乳腺不典型增生疾病的发生、发展中发挥了重要作用，应加强DNA突变位点测定，提高临床疾病确诊率。