调控P2X7修饰小胶质细胞功能治疗放射性脑损伤

放射后小胶质细胞（MG）既通过分泌炎症递质介导神经损伤，又通过吞噬受损细胞促进损伤修复发挥保护作用。但放射后MG通过何种机制调控分泌和吞噬功能尚不明确。我们的前期实验及文献均提示P2X7可能介导MG分泌和吞噬作用使其转向完全损伤的功能，并介导损伤组织释放的ATP激活MG扩大炎症损伤。本课题拟：①通过离体及在体实验，以调控剂结合P2X7-/-细胞株及基因敲除动物，比较MG分泌炎症递质、荧光乳胶珠法测定吞噬指数和微透析检测ATP水平，明确P2X7在放射后介导MG分泌炎症递质、减弱MG吞噬、介导ATP级联放大损伤的作用；②研究调控MG分泌和吞噬的信号通路，明确P2X7调控MG的机制，从而揭示P2X7可作为MG"趋利避害"的功能调控点；③通过神经元共培养、髓鞘形成共培养及在体神经病理学检查，证实调控P2X7可有效改善放射后脑损伤，促进神经修复，为以P2受体为靶点治疗放射性脑损伤提供新的方法和思路。

放射后小胶质细胞（MG）通过分泌炎症递质介导神经损伤。但放射后MG通过何种机制调控分泌功能尚不明确。本课题通过离体及在体实验，以调控剂结合P2X7缺陷细胞株以及动物实验，比较MG分泌炎症递质和ATP水平，明确放射后MG具有分泌ATP并激活P2X7分泌炎症因子的作用。我们的研究发现，原代小胶质细胞照射后呈激活状态，ATP水平增加，P2X7受体的转录及蛋白表达均增加，同时发现炎症因子IL-6，COX-2，TNF-α也升高。照射前给予P2X7拮抗剂BBG或对P2X7进行RNA干扰后，炎症因子表达量显著下降。在体水平，我们建立稳定的放射性脑损伤动物模型，通过组织切片的免疫荧光共染，发现P2X7在MG上大量表达，且脑内炎症因子的RNA、蛋白水平均较对照组显著升高。给予BBG后，小鼠海马SGZ区神经再生细胞较照射组显著好转。通过对放射性脑损伤患者的脑脊液检测，发现脑脊液的ATP浓度与疾病预后相关。本课题从离体及在体水平证明了放射后MG的活化中P2X7受体起到了关键的调节作用。