RAGE介导Aβ经内质网应激损伤血脑屏障的机制及益智防呆方的干预研究

Aβ can induce apoptosis via endoplasmic reticulum stress (ERS), thus damage the blood brain barrier (BBB) and exacerbate the Alzheimer's disease (AD) course. The receptor for advanced glycation end products (RAGE)is an important regulatory factor of Aβneurotoxicity, and acts as a crucial role in the BBB damage induced by Aβ. Evidence shows tha ERS is RAGE-dependent, and our own studies show that Aβcan increase RAGE expression in BBB.Therefore, we speculate that RAGE has a role in the progress of the BBB damage caused by Aβvia ERS,and blocking the interaction can attenuate AD. We will take the BBB model and APP/PS1 AD model mice to study the change of ERS related proteins in vitro and in vivo, and further explore the role of RAGE, and reveal the complex relationship of Aβ-RAGE with BBB damage caused by Aβvia ERS. Meanwhile, we utilize YiZhi-FangDai Fang to interfere this progress to uncover the mechanism of this formula's therapeutic effect and the principle of "replenishing primoridal jing and essense, reducing phlegmas and eliminating blood stasis". We hope this can offer a new therapeutic method for AD and rich the modernization research of traditional chinese medicinal therapeutic rules.

Aβ可通过内质网应激（ERS）介导细胞凋亡，损伤血脑屏障（BBB），从而促进阿尔茨海默病（AD）发生发展。晚期糖基化终产物受体（RAGE）作为Aβ神经毒性的重要调节因子，在Aβ损伤BBB中发挥重要作用。有研究表明ERS具有RAGE依赖性。我们前期研究也发现Aβ可诱导BBB上RAGE表达增加。故我们推测：RAGE在Aβ介导BBB损伤中起着桥梁作用并放大该反应，而阻断该路径可有效抑制Aβ对BBB的损伤，从而缓解AD发展。本项目将采用体外BBB模型和APP/PS1转基因小鼠，分别从细胞、分子水平观察Aβ损伤BBB时RAGE表达、ERS相关蛋白等的变化及相互作用，探究RAGE介导Aβ经ERS损伤BBB的分子机制，阐释AD发病机理；同期施以临床有效组方-益智防呆方，观察其干预效应，以揭示培元填精、化痰祛瘀法治疗AD的现代医学原理，既为AD治疗提供新思路，也是中医治则治法现代化研究的丰富。

Aβ可通过内质网应激（ERS）介导细胞凋亡，损伤血脑屏障（BBB），从而促进阿尔茨海默病（AD）发生发展。晚期糖基化终产物受体（RAGE）作为Aβ神经毒性的重要调节因子，在Aβ损伤BBB中发挥重要作用。有研究表明ERS具有RAGE依赖性。我们前期研究也发现Aβ可诱导BBB上RAGE表达增加。故我们推测：RAGE在Aβ介导BBB损伤中起着桥梁作用并放大该反应，而阻断该路径可有效抑制Aβ对BBB的损伤，从而缓解AD发展。为了验证此假说，本课题首先通过培养小鼠BMEC建立了BBB体外模型；然后通过干扰RAGE表达等方法，课题组发现Aβ引起的BBB通透性增加有所改善，紧密连接（TJ）相关蛋白水平改善，结果表明了RAGE在Aβ损伤BBB内皮细胞紧密连接中起到关键作用。课题组进一步研究发现干扰RAGE的表达可显著逆转Aβ所引起的ERS相关蛋白GRP78、xbp-1和CHOP的表达，以及使bEnd.3内皮细胞存活率降低，LDH释放增加，凋亡相关蛋白表达增加，TJ蛋白ZO-1和Occludin表达下降以及BBB通透性增加等现象被显著逆转。随后课题组研究了细胞经不同浓度的YZFDF预处理后，Aβ对ERS相关蛋白、凋亡相关蛋白和TJ蛋白表达的影响，研究结果表明YZFDF对Aβ引起的BBB损伤起到保护作用；并给予不同浓度的YZFDF干预APP/PS1小鼠，研究结果表明YZFDF对APP/PS1小鼠认知功能具有改善作用。并且，在原计划基础上课题组进一步研究了RAGE在Aβ1-42诱导bEnd.3细胞自噬活化与TJ损伤中的作用，拓展了EGB761和YZFDF在Aβ介导SH-SY5Y细胞损伤过程中保护机制的研究。. 总之，本项目采用体外BBB模型和APP/PS1转基因小鼠，分别从细胞、分子水平观察了Aβ损伤BBB时RAGE表达、ERS相关蛋白等的变化及相互作用，基于ERS和自噬探究了RAGE介导Aβ损伤BBB的分子机制，阐释了AD的发病机理；并施以临床有效组方—益智防呆方，观察其干预效应，进一步揭示了培元填精、化痰祛瘀法治疗AD的现代医学原理，既为 AD 治疗提供了新思路，也丰富了中医治则治法现代化研究。