基于“无形之痰”理论探讨健脾祛湿方药二陈汤对血管周脂肪功能的影响及其作用机制

In the theory of Traditional Chinese Medicine, having large amounts of high-calorie food could damage the clearing function of Pi and induce the occurrence of “Tan Shi” in vivo. The access food could be transformed into triglycerides. As a form of invisible phlegm, triglycerides accumulate in perivascular adipose tissue and induces atherosclerosis. Based on our previous investigations, we speculate that Jian Pi Qu Shi formula Er Chen decoction may improve the function of perivascular adipose tissue via skeletal muscle and adipose tissue clearing the invisible phlegm. In order to investigate the mechanism by which Er Chen decoction protects against perivascular adipose tissue dysfunction, this study firstly investigates the effects of Er Chen decoction on the anti-contractile function of perivascular adipose tissue and the triglyceride clearance ability of skeletal muscle and adipose tissue by using various molecular biological techniques in high-fat diet fed rats. Secondly, in C2C12 skeletal muscle cells and 3T3-L1 adipocytes by using Elisa, qPCR, Western-blot and siRNA we investigate the effects of Er Chen decoction containing serum on the process of triglyceride clearance and the involvement of AMPK pathway in this process. This study would be able to develop the scientific concept of invisible phlegm and provide a novel thinking for dealing with atherosclerosis.

中医认为过食“肥甘厚腻”会损伤脾的运化功能而导致体内形成“痰湿”。过剩的食物在体内转化为甘油三酯，其作为“无形之痰”累积于血管周脂肪而诱发动脉粥样硬化。在前期研究的基础上，我们认为健脾祛湿方药二陈汤通过骨骼肌、脂肪组织运化 “无形之痰”而改善血管周脂肪功能。为研究二陈汤抗血管周脂肪功能紊乱的机制，本项目首先在高脂饮食的大鼠模型中，应用多种分子生物学技术研究二陈汤对血管周脂肪抗血管收缩功能及对骨骼肌、脂肪组织“运化”甘油三酯的影响。其次，在C2C12骨骼肌细胞、3T3-L1脂肪细胞中，应用Elisa、qPCR、Western-blot、siRNA等技术研究二陈汤含药血清对骨骼肌细胞、脂肪细胞“运化”甘油三酯的影响以及AMPK信号通路在其中的作用。本项目将丰富“无形之痰”的科学内涵，为动脉粥样硬化的防治提供新思路。

肥胖是导致动脉粥样硬化的独立危险因素。血管周脂肪功能紊乱在动脉粥样硬化中扮演重要角色。本项目基于“脾主运化“理论研究健脾祛湿方药二陈汤对血管周脂肪功能的影响及其机制。首先, 在高脂饮食大鼠模型中发现二陈汤可以降低大鼠体重、血脂并提高胰岛素敏感性；组织学检测发现二陈汤可降低胸主动脉管周脂肪、腹股沟区皮下脂肪、附睾周脂肪甘油三酯含量；qPCR检测发现高脂饮食可导致胸主动脉促炎因子TNF-α表达升高；二陈汤干预后可抑制TNF-α的表达。这提示高脂饮食可导致胸主动脉管周脂肪内分泌功能紊乱，二陈汤干预后可抑制这一效应。.基于”脾主肌肉“理论，我们认为二陈汤改善管周脂肪内分泌功能可能与增强骨骼肌“运化”甘油三酯的能力有关。应用多种分子生物学技术发现二陈汤可上调高脂饮食大鼠骨骼肌中运化甘油三酯关键蛋白CPT-1b并激活促分解代谢的AMPK通路。由于棕色脂肪与骨骼肌在组织发育中同属Myf-5阳性祖细胞，因此我们认为二陈汤也可能加强棕色脂肪运化甘油三酯的能力。应用多种分子生物学技术我们发现二陈汤干预后可上调棕色脂肪分解甘油三酯AMPK-ATGL通路，同时上调棕色脂肪中产热相关蛋白UCP-1与PGC-1α的蛋白和mRNA水平。另一方面，本项目在体外的C2C12骨骼肌细胞和3T3-L1脂肪细胞模型中发现二陈汤含药血清可激活AMPK-ATGL通路，并上调CPT-1b蛋白的表达水平。这些结果提示二陈汤降低胸主动脉中甘油三酯的含量改善其内分泌功能可能与加强骨骼肌与棕色脂肪氧化甘油三酯的能力有关。这丰富了”脾主运化“的科学内涵，为防治动脉粥样硬化提供新的思路。最后，我们应用HPLC-MS技术，对二陈汤中有效成分进行初步分析，并在体外模型中筛选激活AMPK信号通路的单体，为防治肥胖与动脉粥样硬化提供实验依据。