猪免疫识别信号途径RIG-I的分子作用及其在猪瘟病毒感染中的免疫调控机制研究

RIG-I信号途径参与识别细胞质中的病毒RNA并启动免疫应答，在抗病毒免疫中发挥着重要的作用，与疾病的发生有密切关系。近年来，RIG-I作为重要的免疫识别分子在抗病毒免疫中的作用及意义引起了国内外免疫学界、医学界的广泛关注。而在畜牧兽医方面，有关动物RIG-I的研究不多，对猪RIG-I的生物免疫学功能、作用及与病毒的关系所知甚少。鉴于此，本项目根据RIG-I信号途径的理论及相关成果，结合猪瘟发病特点，在我们前期研究工作的基础上，针对猪瘟病毒感染发病的机制尚不清楚这一科学问题，以RIG-I信号转导及猪瘟病毒感染过程中的免疫调控分子机制为主线，从猪瘟病毒体内/体外感染入手，选择相关细胞、信号转导的关键蛋白分子、细胞因子等作为对象，从不同层次和角度进行研究，以发现参与调控猪瘟病毒感染的新分子，力求从细胞与机体水平探讨猪瘟病毒感染引起机体免疫功能紊乱的分子机制，为猪瘟的防控提供新的思路。

模式识别受体（PRR）视黄酸诱导基因I（RIG-I）能识别胞质溶胶中病毒复制产生的双链RNA（dsRNA）以及5’磷酸化的病毒RNA，并通过线粒体定位抗病毒蛋白(MAVS)启动下游信号促进干扰素的表达，干扰素再通过其效应器干扰病毒复制，发挥生物学效应。RIG-I在机体抗病毒天然免疫反应中起着重要的作用，本项目开展了猪瘟病毒（CSFV）体内与体外感染对RIG-I信号通路的影响及调控机制的研究。首先，构建了猪RIG-I不同结构域表达质粒，研究不同结构域的信号调控功能及CSFV感染对质粒诱导信号的影响；其次，以PK-15细胞和巨噬细胞为模型研究CSFV体外感染触发细胞RIG-I信号通路及对下游免疫因子分泌的影响；接着，应用RNA干扰抑制RIG-I及MDA5的表达，研究RIG-I及MDA5在细胞免疫识别CSFV过程中的作用；最后，开展了CSFV体内感染触发淋巴细胞RIG-I信号转导途径及RIG-I介导的信号途径在猪瘟病毒体内感染过程中的作用研究。并针对项目研究结果，开展了RIG-I下游蛋白PKR对CSFV复制及对RIG-I信号通路影响，以及细胞自噬对RIG-I信号通路调控的研究。本项目在多种细胞多个层面研究了CSFV与宿主RIG-I信号途径的关系。