补体调节蛋白质C1抑制物的新功能研究

补体调节蛋白质C1抑制物（C1INH）具有抗炎功能，可防治革兰氏阴性杆菌内毒素（LPS）诱导实验性休克，但分子机制尚不清楚。我们研究结果已证实： C1INH的N-端区（1-97aa）直接与LPS结合，阻止LPS结合到靶细胞（如巨噬细胞），抑制炎症介质（如TNF-α）释放，降低LPS诱导小鼠内毒素性休克死亡率。申请内容：（1）确定C1INH的N-端区LPS结合识别位点，筛选抗LPS多肽；（2）分析C1INH-或抗LPS多肽-LPS结合复合物代谢；（3）阐明C1IN或抗LPS多肽阻止LPS诱导培养内皮细胞损伤和小鼠体内血管内血浆外渗机制；（4）利用三种小鼠感染性休克模型，探索C1INH或抗LPS多肽抗内毒素性休克作用。此研究试图：C1INH或抗LPS多肽具有直接中和LPS分子毒性和抑制LPS生物学的新功能,它可能作为一种候选新药，为解决临床上治疗革兰氏阴性杆菌感染性休克棘手问题提供基础性研究。

免疫补体系统的调节蛋白C1抑制物（complement regulatory protein C1 inhibitor, C1INH）具有抗炎症作用，这种作用有助于对临床上内毒素血症和内毒素性休克的防治。..本课题研究证实：（1）在分子水平上，确定C1INH多肽与LPS分子间体外相互作用包括C1INH的N端正电荷氨基酸突变和N-糖基化位点突变后对与LPS结合的影响。 C1INH正电荷两侧疏水性氨基酸有助于暴露短肽与LPS作用的氨基酸位点，带正电荷氨基酸多肽与LPS有较强的亲和力，确定C1INH多肽与LPS分子间体外相互作用；（2）C1INHN端具有抗LPS多肽CN1(SLQDRGEGKVATTVISKML)能有效的与LPS分子间体外相互作用；（3）在细胞水平上，通过体外C1INH多肽与LPS结合实验及多肽抑制LPS与巨噬细胞结合实验，确定抗LPS多肽。在PBMC水平上，C1INH多肽抑制LPS或LPS源性Lipid A诱导PBMC炎症因子TNFα释放；（4）在动物实验上，C1INH多肽主要分布在血中，其次是胰，分布最少的是脑和肝；（5）应用免疫原性肽抗体技术制备抗人C1INH的N端多肽多克隆抗体纯度达到95%，能有限的结合抗原人C1INH;（6）C1INH多肽＋HSA在多种属表达系统建立，筛选和确定一株能表达C1INH的N端多肽与人HSA融合的GS115菌株，命名为CN1432HSA融合蛋白质。（7）CN1432HSA融合蛋白质表达及纯化工艺条件优化；（8） CN1432HSA融合蛋白质蛋白能够抑制LPS诱导血管内皮细胞凋亡；（9）CN1432HSA融合蛋白质防治小鼠内毒素血症休克。..本课题研究提供新思路：（1）C1INH通过直接结合LPS而具有抗内毒素血症休克新功能；（2）CN1432HSA融合蛋白质具有防治内毒素血症休克作用；（3）C1INH抗LPS新功能发现有助于新药的研发。需进一步研究新计划：（1）CN1432HSA融合蛋白质与LPS分子作用机制；（2）CN1432HSA融合蛋白质表达和纯化的优化;（3）CN1432HSA融合蛋白质的药理学和药代动力学机制；（4） CN1432HSA融合蛋白质抗内毒素血症休克机制。