气体信号分子硫化氢通过调控p38MAPK-microRNA通路影响绒毛外滋养细胞坏死性凋亡的研究

Preeclampsia is a pregnancy specific disease. The dysfunction of extravillous trophoblast cells ’s(EVT) proliferation, adhesion, invasion, transformation, update is considered an important factor in the development of pre-eclampsia. The way of cell death including four ways，such as apoptosis, necrosis, autophagy and necroptosis. Excessive apoptosis and autophagy of EVT have the effect of its invasion. Some studies found that hydrogen sulfide (H2S) can against the injury of myocardial cell injury by inhibit its necroptosis. And there are many signaling pathways that can regulate the cell’s necroptosis. Our previous study found that the phenomenon of necroptosis exist in the placenta of preeclampsia, hydrogen sulfide can reduce the expression of necroptosis protein, can affect the ability of EVT’s migration, adhesion and invasion. This research based on the existing results, to study whether the phenomenon of necroptosis exsit in EVT, and the function of H2S in this process and its mechanism. Revealing the physiological role of early pregnant and mechanism, and provide a theoretical basis for the pathogenesis of preeclampsia.

子痫前期是妊娠期特发疾病，绒毛外滋养细胞（EVT）的增殖、粘附、侵袭、转换、更新的功能障碍被认为是子痫前期发生的重要因素，细胞死亡可分为凋亡、坏死、自噬和坏死性凋亡，有研究表明滋养细胞过度的凋亡和自噬影响滋养细胞的侵袭，目前研究又发现硫化氢（H2S）可通过抑制坏死性凋亡对抗缺血性的心肌细胞损伤，且发现调节细胞坏死性凋亡的信号通路有多条。我们的前期研究发现：子痫前期的胎盘组织中存在坏死性凋亡，硫化氢能够减少坏死性凋亡蛋白的表达，且H2S影响绒毛外滋养细胞的迁移、粘附、侵袭能力。本课题拟在已有研究的基础上，研究绒毛外滋养细胞是否存在坏死性凋亡，H2S对绒毛外滋养细胞坏死性凋亡的抑制作用，并进一步研究H2S对神经酰胺诱导的绒毛外滋养细胞坏死性凋亡的影响并寻找其中发挥作用的信号通路。从而揭示H2S在孕早期的生理作用及作用机制，为子痫前期发病机制的研究提供理论依据。

子痫前期是妊娠期特发性疾病，早产是其重要并发症之一。绒毛外滋养细胞（EVT）迁移、侵袭行为能力的异常可导致胎盘浅着床，进而在子痫前期的发生发展过程中发挥重要作用。胎盘绒毛干形成和EVT侵入子宫蜕膜层的过程中，增殖、转换、更新是连续、重叠、序贯进行的。EVT细胞过度死亡，影响EVT细胞的分化和成熟，进而影响EVT细胞的迁徙与侵袭而诱发子痫前期。坏死性凋亡是一种炎症性的死亡方式，过多炎症因子浸润导致EVT侵袭不足而诱发子痫前期。研究发现：子痫前期胎盘组织中坏死性凋亡蛋白RIPA1、RIPA3，活性磷酸化p38蛋白表达上调，内源性硫化氢合成酶（胱硫醚-β-合成酶，CBS）表达下调，并且RIPA1和RIPA3表达与CBS表达呈负相关。并且免疫荧光检测到RIPA1子痫前期胎盘组织中表达显著。在细胞实验中，神经酰胺（CER）+Caspase抑制剂（Q-VD -OPh）诱导JEG-3坏死性凋亡中，凋亡细胞数量增加，炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白及mRNA表达增加，细胞增殖明显受抑制。NaHS 、L-cys 、nec-1 ，可明显减少RIPA1和RIPA3、IL-1β、IL-6和TNF-α表达，改善JEG-3的增殖，减少细胞的凋亡。另外预先给予P38MAPK抑制剂（SB203580）抑制CER+QVD诱导的IL-1β、IL-6、TNF-α、RIPA1和RIPA3 mRNA的上调，表明硫化氢通过P38MAPK信号通路抑制EVT坏死性凋亡。本课题揭示了坏死性凋亡在子痫前期发病机制的作用及H2S的保护作用。为子痫前期的有效预防打开了思路，为后续研究进一步开展奠定了基础。.除此之外，本课题就尿皮质素（UCN）、核苷酸结合和寡聚化结构域（NOD）受体家族含pyrin结构域3（NLRP3）炎症小体与早产相关性做了深入研究。结果显示： UCNs 通过AC/cAMP信号通路调节妊娠期子宫肌层前列腺素（PGs）分泌，维持妊娠期子宫的功能状态。研究还显示:NLRP3 抑制剂（MCC950）推迟小鼠足月分娩时间并抑制小鼠早产，表明 NLRP3 炎症小体在分娩启动中起着重要作用NLRP3，子宫肌内的 NLRP3 炎症小体可能是一个潜在的治疗靶点。