清肺通络方干预MPP血清代谢组学及相关细胞因子的研究

Mycoplasma pneumonia is one of the main pathogeny of pediatric community-acquired pneumonia, the state of energy metabolism and immune function disorders leading to the disease easy to delayed healing or recurrent episodes, and easily evolve into asthma and chronic cough. Qingfei Tongluo formular is preparation of pediatric department of shanghai Longhua Hospital treating MPP, clearing the lung guard and dredging collaterals, which has better clinical efficacy. We had confirmed that it can reduce the elevated serum IL-4, IL-17 levels of MPP children and improve the blood stasis of MPP mice. .The topic take the TCM "Ying-Wei" doctrine as guide, raise the pathogenesis of MPP as "the guard closed and the Ying stasis". Take interaction of metabolism and inflammation as core mechanism of the body homeostasis, use of 1H NMR techniques to study serum metabolomics of MPP, screening its metabolism markers, and TH1, TH2, TH17cells, the cytokines IL-4, IL-6, IL-17, IL-1β, IL-18, IL-13 in association studies to explore the interaction of cytokines and energy metabolism, a better understanding of microscopic material basis of MPP. Take intersection of metabolism-immune as targets treating MPP, evaluate the efficacy mechanism of Qingfei Tongluo formular.

肺炎支原体是小儿社区获得性肺炎的主要病原之一，其能量代谢和免疫功能的紊乱状态，导致了疾病容易迁延不愈或反复发作，并容易演变为哮喘及慢性咳嗽。清肺通络方是上海市龙华医院儿科治疗支原体肺炎（MPP）的自制制剂，功效清宣肺卫，通络活营，前期已证实有较好的临床疗效，可降低MPP患儿升高的血清IL-4、IL-17水平，改善MPP小鼠的血瘀状态。.本课题以中医学的"营卫学说"为指导，提出MPP发病"卫闭营瘀"的病机，以能量代谢与免疫炎症之间的相互作用为机体稳态调节的核心机制，利用1H NMR技术对MPP小鼠的血清代谢组学进行研究，筛选MPP的代谢标志物，并与TH1、TH2、TH17细胞及炎症因子IL-4、IL-6、IL-17等进行相关研究，探索能量代谢与炎症因子的相互作用，进一步认识MPP的微观物质基础，将"代谢-免疫"交叉点作为中药清肺通络方干预治疗MPP的靶点，评价其疗效机理。

1.背景：支原体肺炎（MPP）可引起重症和多系统损伤，容易演变为哮喘。清肺通络方是上海市龙华医院儿科治疗MPP的自制制剂，前期已证实有较好的临床疗效。.2.研究内容.以免疫炎症与营养代谢为机体稳态调节的核心机制，分析MPP小鼠血清代谢组学特征；检测BALF中IL-4、IL-6、IL-17、IL-1β、IL-18、IL-13和肺组织JNK、ERK、PJNK、PERK、TLR、NF-кB，进一步认识MPP的微观物质基础，及中药干预情况，将“代谢-免疫”交叉点作为中药清肺通络方干预治疗MPP的靶点，评价其疗效机理。.结果：.(1)以BALB/c小鼠MPFH滴鼻法复制MPP模型，小鼠肺组织MP-DNA升高，肺间质炎细胞浸润，支气管管腔狭窄，肺血管内血栓形成。.(2)清肺通络方体内可清除MP，量效作用不显著。.(3)MPP小鼠BALF中白细胞总数，中性粒细胞、巨噬细胞及嗜酸性细胞升高。清肺通络方可改善MPP小鼠BALF白细胞总数及巨噬细胞百分比，但量效作用不明显。.(4)MPP小鼠存在炎症细胞因子网络失调，IL-4、IL-6、IL-17、IL-1β、IL-18均升高，经治疗后可下调。.(5) MPP小鼠外周血TH1、TH2、TH17细胞上调，清肺通络方可下调。.(6) MPP小鼠通路信号分子PJNK、PERK、TLR2、TLR4、NF-кB在肺组织表达增加，经治疗后中药中剂量和大剂量组均可回调PERK、TLR2、TLR4，且有量效关系。中药大剂量组尚可回调PJNK和NF-кB。.(7)选用质谱MC-MS分析MPP血清代谢组学特征，代谢轮廓发生改变，经治疗干预后逐渐恢复；差异物分析筛查出19种化合物为MPP生物标志物，以脂质代谢物为主，主要与磷脂代谢相关，其中磷脂酰肌醇的改变最明显。经治疗也逐渐回调。.结论：.(1) MPP动物模型符合 “肺卫郁闭，营血瘀滞”的中医病机特点。.(2)支原体脂多糖可激活TLR介导反应，诱导抗微生物防御系统，启动一系列炎性应答，TH细胞活化，细胞因子大量产生，虽有助于MP的清除，但同时也造成组织的损伤。继而细胞凋亡启动，线粒体功能异常，引起代谢紊乱。这是引发多系统受损和哮喘的原因。.(3)清肺通络方对MP有一定的清除作用，同时可通过调节机体免疫，减轻对机体的损伤。对筛查出的19种化合物有调节作用，改善机体代谢。