A2δ1亚基阳性特异性PET探针的构建及在肝癌干细胞诊疗的研究

Occurrence and metastasis of hepatic cellular cancer (HCC) have seriously affected people's living standards. Reduce the recurrence and mortality rate of HCC is virtual important to improve the prognosis of HCC. Based on this finding of calcium channelα2δ1 subunit recpetor in HCC, this project aims to develop α2δ1 targeting novel position emission tomography probe for the detection of liver cancer stem cell (LCSC). Firstly, using the HM-20 medical cyclotron to produce the new radio-uclide 64Cu, α2δ1 specific monoclonal antibody 1B50-1 will be modified and labeled to get the 64Cu-NOTA-1B50-1 PET probe. Then, we will use the 64Cu-NOTA-1B50-1 probe for the qualitative and quantitative detection of liver cancer stem cells, and the precise location of liver cancer stem cells. Furthermore, the Micro-PET was used to analyze the correlation between tumor cell proliferation and malignant tumor of α2δ1 receptor. In conclusion, this project will be developed through based on α2δ1 receptor targeting 64Cu-NOTA-1B50-1 antiodoby, for non invasive detects of liver cancer stem cell, and provides precison molecular imaging for LCSC treatment and therapy.

肝癌的发生、发展严重影响人民生活水平。降低肝癌高复发率、高致死率对改善肝癌预后尤为重要。本项目团队在肝癌干细胞研究取得突破性成果的基础上，本项目拟开发以钙离子通道α2δ1亚基为靶点，实时、在体分子水平探测肝癌干细胞的新型分子探针。本项目首先将通过对具有α2δ1特异性的1B50-1单抗进行修饰，而后利用医用回旋加速器制备新型核素64Cu并制备64Cu-NOTA-1B50-1 PET探针，而后利用64Cu-NOTA-1B50-1探针对肝癌干细胞进行定性、定量的检测，并进行肝癌干细胞的精确定位。并进一步通过该探针进行Micro-PET分析α2δ1受体肝癌干细胞与肿瘤恶性相关性。总而言之，本项目将通过开发基于α2δ1靶向的64Cu-NOTA-1B50-1分子探针，精确、无创的示踪肝癌干细胞，为靶向肿瘤干细胞的肝癌治疗提供依据和影像学基础。

本项目拟在前期已取得重要进展的基础上，在国内外率先开展肝癌干细胞钙离子通道 α2δ1 亚基为靶点的新型 PET 探针 64Cu-NOTA-1B50-1及64Cu-NOTA-1B50-1-F(ab’)2的研究，用于肝细胞肝癌的定位及靶向治疗影像学指导。1. 本项目首先对与 α2δ1亚基具有高亲和力的单克隆抗体1B50-1进行双功能偶联剂修饰，并进行放射性核素64Cu标记，获得可用于 PET/CT 显像的新型分子探针64Cu-NOTA-1B50-1；2. 通过酶解法制备抗体片段1B50-1-F(ab’)2，利用分子生物学方法进行1B50-1-F(ab’)2亲和力、靶向性等研究；然后对其进行修饰及64Cu标记，获得相应的新型PET分子探针64Cu-NOTA-1B50-1-F(ab’)2；3. 利用分子生物学/核医学方法进行分子探针的稳定性、亲和力、细胞摄取等体外研究；借助于小动物成像设备，开展探针在 α2δ1不同表达水平的模型动物的体内活体肿瘤靶向性分析；4. 通过免疫组化方法进行组织定位研究，寻找肝癌干细胞的不均质分布特性，并借助于 PET 显像的高分辨率、组织定位、靶区勾划确认勾划的靶区/病理检测靶区的比较研究，实现通过 α2δ1 特异性 PET 探针准确、在体无创的示踪肝癌干细胞，以期在肝癌诊断、预测疗效和评价预后中取得临床疗效。