补体致血小板溶解在药物免疫性血小板减少症中的作用及机制研究

More than 280 drugs, including commonly used drugs, can cause severe thrombocytopenia and life-threatening bleeding. Drug-induced immune thrombocytopenia (DITP) is mediated by IgG d-dAbs which bind to platelet GPIb-IX and/or GPIIb/IIIa, and sensitized platelets are presumably cleared prematurely by splenic and hepatic macrophages. Currently there is no effective treatment, in particular for bleeding patients. Our preliminary results have suggested that binding of d-dAbs to the platelets in the presence of drug activates complement cascade, causing platelet lysis. Based on these results, we propose that binding of d-dAbs to the platelets in the presence of drug activates complement cascade is an important factor responsible for the substantial and rapid platelet destruction in DITP. This project aims to define the role of complement in platelet destruction induced by drug-dependent antibodies of DITP in vitro and in vivo, and to develop more effective treatments and drugs(i.e. Eculizumab).

药物免疫性血小板减少症（DITP）是药物引起的免疫性血小板减少症，出血严重时危及生命且治疗非常棘手。许多常用药物均可导致DITP，目前观点认为DITP是通过药物依赖性抗体（d-dAbs）与血小板表面的糖蛋白结合，使肝、脾巨噬细胞吞噬抗体结合的血小板而导致血小板减少。我们前期研究发现，在动物体内，通过CD32阻断巨噬细胞的吞噬后，不能完全抑制血小板减少。还发现DITP病人体内产生的d-dAbs在药物存在下与血小板表面糖蛋白结合后致血小板溶解，并在血小板表面检测到补体C3。在此基础上，我们将继续研究补体系统在DITP血小板破坏中的作用，从而明确血小板溶解是由于在血小板表面上形成C5-C9补体复合物引起的。并采用补体C5抑制剂艾库组单抗阻断这一过程，观察血小板减少的情况，从不同角度论证补体激活致血小板溶解是DITP中血小板减少的另一重要因素，本研究可为使用艾库组单抗治疗DITP提供理论依据。

项目的背景.药物免疫性血小板减少症（DITP）是药物引起的免疫性血小板减少症。药物依赖性抗体与血小板表面的糖蛋白结合，导致血小板破坏而引起出血，严重时危及生命且治疗非常棘手。..主要研究内容、重要结果、关键数据.1 利用体外试验，研究药物依赖性抗血小板抗体对血小板的破坏作用。.通过体外试验，我们发现（1）药物依赖性抗血小板抗体主要为抗血小板表面糖蛋白IX和抗血小板表面糖蛋白IIb/IIIa。当抗血小板表面糖蛋白IX抗体与血小板表面糖蛋白IX上的特异部位结合后，激活NADPH 氧化酶，产生过氧化物（H2O2）, 从而裂解血小板。这一过程并不激活补体，也不需要补体参与。但这一过程可被一特异多肽所阻断。（2）而当抗血小板表面糖蛋白IIb/IIIa抗体与血小板表面糖蛋白IIb/IIIa结合后，不能激活NADPH 氧化酶，产生过氧化物（H2O2）, 从而裂解血小板。（3）但有些抗血小板表面糖蛋白IIb/IIIa抗体能与血小板表面糖蛋白IIb/IIIa上的钙离子依赖性抗原决定簇结合，抑制其聚集功能，引起出血。..2利用动物模型，研究药物依赖性抗血小板抗体对血小板的破坏作用。.通过体内试验（动物模型），我们发现（1）当抗血小板表面糖蛋白IX抗体与血液循环中血小板的表面糖蛋白IX上的特异部位结合后，通过两个途径破坏血小板。1）裂解血小板。2）巨噬细胞吞噬与抗血小板表面糖蛋白lb/IX抗体结合的血小板。（2）当抗血小板表面糖蛋白IIb/IIIa抗体与血液循环中血小板的表面糖蛋白IIb/IIIa结合后, 主要通过巨噬细胞吞噬与抗血小板表面糖蛋白IIb/IIIa抗体结合的血小板, 至血小板破坏。.3利用动物模型，评估目前治疗药物（糖皮质激素和丙种球蛋白）单独以及合并用药对药物免疫性血小板减少症的治疗效果。.通过体内试验（动物模型），我们发现（1）丙种球蛋白和糖皮质激素均可以部分地阻断由抗血小板表面糖蛋白IX抗体介导的血小板破坏和清除过程。（2）.丙种球蛋白和糖皮质激素均可以有效地阻断由抗血小板表面糖蛋白IIb/IIIa抗体介导的血小板破坏和清除过程。（3）丙种球蛋白可立即并快速减缓由抗血小板表面糖蛋白IX和IIb/IIIa抗体所致血液循环中血小板的清除，并呈剂量依赖性。（4）糖皮质激素可以减缓由抗血小板表面糖蛋白IX和IIb/IIIa抗体所致血液循环中血小板的清除过程，其治疗效果呈时间及