利用Sp17单克隆抗体-阿霉素偶联物靶向治疗卵巢癌的研究

精子蛋白17（sperm protein 17, Sp17）是近年来新发现的一种肿瘤相关抗原，具有在正常体细胞（睾丸除外）中限制性表达，在肿瘤细胞中高表达的特点，是靶向治疗的理想候选靶分子。本项目组已成功制备了高特异性和亲和力的Sp17的单克隆抗体，并将其运用于多种临床肿瘤的标本Sp17的检测，发现Sp17在妇科相关肿瘤组织中高频表达。本研究拟利用动物在体肿瘤光学成像技术，考察该单克隆抗体对Sp17高表达的肿瘤的靶向作用。拟利用高表达Sp17的卵巢癌细胞和动物模型，一方面考察Sp17单克隆抗体的体内外抗肿瘤活性，并探讨其作用机制；一方面以Sp17单克隆抗体为靶向载体，将"弹头"药物阿霉素与抗体偶联，形成抗体药物偶联物，在确保其抗体免疫活性不受影响的前提下，考察其体内外抗肿瘤活性及靶向性，为研制高效低毒，特异性强的抗肿瘤药物提供实验依据，开发具有良好应用前景的抗卵巢癌抗体靶向药物。

本项目以癌瘤-睾丸（cancer-testis, CT）抗原-精子蛋白17（sperm protein 17, Sp17）为靶点，利用制备的抗Sp17单克隆抗体（anti-Sp17 mAb）与生物相容性近红外染料吲哚花青素衍生物（ICG-Der-2）偶联，小鼠在体光学成像考察anti-Sp17 mAb的肿瘤靶向作用，结果显示anti-Sp17 mAb能够特异、稳定地结合于肿瘤部位。利用高表达Sp17的卵巢癌细胞和动物模型，体内外考察anti-Sp17 mAb及其阿霉素（Doxorubicin，DOX）免疫偶联物的抗肿瘤活性。体外结果显示Sp17 mAb对Sp17+ 的SKOV3细胞无直接细胞毒作用，但当以外周血单个核细胞或血清为效应细胞或效应因子时， Sp17 mAb对SKOV3细胞的抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ADCC）作用和补体依赖的细胞毒作用（CDC）均成呈剂量依赖关系。进而，我们利用DOX和抗体结构中的氨基，以二琥珀酰亚胺基酒石酸盐（DST）为交联剂制备anti-Sp17 mAb-DOX偶联物，并考察其体内外抗卵巢癌活性，结果显示一个抗体分子上平均偶联约6个DOX分子；形成的anti-Sp17 mAb-DOX偶联物保留了anti-Sp17 mAb对Sp17蛋白和Sp17+的卵巢癌细胞株SKOV3和HO8910的结合能力和免疫反应性；并能够内化至Sp17+的细胞内；体外结果显示 anti-Sp17 mAb-DOX偶联物能明显降低SKOV3和HO8910细胞活力，加速细胞的凋亡；体内实验结果显示，anti-Sp17 mAb-DOX偶联物能明显抑制荷瘤裸鼠的肿瘤的生长，且与DOX组对比，anti-Sp17 mAb -DOX偶联物的毒副作用明显降低。以上结果表明，Sp17是卵巢癌潜在的治疗靶点，以anti-Sp17 mAb为基础的免疫偶联物是有良好应用前景治疗卵巢癌的靶向药物。本项目已发表论文5篇，其中1篇被SCI收录，多次参加学术会议，为卵巢癌的靶向治疗提供新的途径和理论依据。