鱼类弹状病毒基因组的分子剖析及致病机理研究

弹状病毒是鱼类及多种水产动物的高致病性病原。申请者在从我国淡、海水养殖的鳜鱼和大菱鲆中，分离鉴定出弹状病毒SCRV与SMRV及对病毒基因进行部分测序的前期工作基础上，拟对这两种病毒基因组进行分子剖析及致病机理研究。经制备病毒基因组RNA、反转录、5'和3' RACE、PCR产物分析等程序，测定病毒基因组序列，绘制基因组织结构图，揭示病毒基因及其调控元件的结构特征，比较这两种弹状病毒与其它已知弹状病毒基因组的异同及进化关系。设计、筛选以SCRV与SMRV G基因或N基因转录本为靶标的小分子干扰RNA(siRNA)，导入鱼类培养细胞，攻毒后，运用激光扫描共聚焦显微观察、PCR和空斑测定，监测鱼类弹状病毒侵染及对宿主细胞病变和空斑形成的影响，了解弹状病毒G蛋白或N蛋白对病毒感染宿主细胞的靶向作用。针对鱼类弹状病毒进行基因结构与功能、病原与宿主、分析与综合并举的研究，探讨鱼类弹状病毒的致病机理。