反复Coolidge效应致大鼠HPA轴功能低下的形成机制及补肾药物干预研究

Studies have shown that Kidney Yang deficiency Zheng is characterized by hypofunction in hypothalamic-pituitary-adrenocortical (HPA) axis. The main characteristic of the syndrome of chronic fatigue syndrome and post-traumatic stress syndrome in western medicine is also HPA axis hypofunction. But the causes and prevention strategies of HPA axis hypofunction are a lack of research in this area. The etiology of traditional Chinese medicine considers abused and excessive sexual behavior as an important reason for the formation of Kidney Yang deficiency Zheng. Sexual activity may release oxytocin and opioid peptides from sexual brain regions to hypothalamic CRH neurons, or modify plasticity of GABAergic and Glutamatergic neurons in hypothalamus, to inhibit HPA axis function. In our previous studies, repeated Coolidge effects were used to simulate abused and excessive sexual behavior, and we found that after 15~18 complete and continuous Coolidge effects, rats showed decreased adrenocortical function and accompanied by symptoms of Kidney Yang deficiency Zheng. This project studies its mechanism， first, we will study the effect of repeated Coolidge effects on the dynamic changes of oxytocin, opioid peptides et al. and related neuronal remodeling around hypothalamic CRH neurons. Second, in the context of blocking signaling of oxytocin, opioid peptides et al., the inhibiting role of excessive sexual activity on HPA function will be investigated. Finally, effects and underlying mechanisms of Kidney tonifying drugs on the above process were also studied. The project provides new ideas and methods for the effective prevention and treatment of HPA axis hypofunction related diseases.

研究发现肾阳虚证存在下丘脑-垂体-肾上腺皮质（HPA）轴功能低下；西医学的慢性疲劳综合征、创伤后应激综合征等也以HPA轴功能低下为主要特征，但HPA轴功能低下的原因和防治策略鲜有研究。中医病因学认为房室不节是肾阳虚证形成的重要原因，研究则提示性活动脑中枢可能向下丘脑CRH神经元释放催产素、阿片肽等物质或通过下丘脑GABAergic和glutamatergic神经元重塑而抑制HPA轴功能。课题组前期采用反复Coolidge效应模拟房室不节，发现经15~18次Coolidge效应，大鼠肾上腺皮质功能低下，并出现肾阳虚证表现。本项目深入研究其机制，首先研究反复Coolidge效应过程中，下丘脑CRH神经元周围催产素、阿片肽等及相关神经元重塑的动态变化；并研究阻断上述信号后，过度性活动还能否抑制HPA轴功能;最后研究补肾中药的干预作用。项目为有效防治HPA轴功能低下相关疾病提供了新的思路和方法。

下丘脑-垂体-肾上腺皮质（HPA）轴功能或储备功能降低至少是部分肾阳虚患者的关键特征。中医认为房室过度是肾阳虚形成的重要原因，因而本研究假设过度性行为可能导致HPA轴功能降低。Coolidge效应是动物性行为的一个重要特性，即性满足后，若更换交配对象，动物又能重新进行性活动，直至完全失去性活动的能力。研究发现大鼠、小鼠、仓鼠、猕猴、公牛等都具有这一特征。本研究发现动物在1~2次Coolidge效应之后，大鼠外观及行为并无明显变化。但动物经历16次Coolidge效应之后（约2.5个月），动物行为变得略迟钝、活动性降低，血浆皮质酮低于对照组，并具统计学差异（P < 0.05）。该模型也伴随其它神经内分泌障碍，包括TSH水平升高（均P<0.05），胰岛素水平升高（P<0.01），睾酮水平显著降低（P<0.05）。发现反复Coolidge效应大鼠性功能下降尤为明显，至第16次Coolidge效应后，动物骑跨潜伏期、插入潜伏期、射精潜伏期均显著延长、骑跨次数、射精次数、插入次数也显著下降，和对照组比较有显著差异（P<0.05）。. 反复Coolidge效应大鼠的下丘脑CRH神经元表达、神经纤维密度，与对照组比较显著降低（P<0.05）。下丘脑GR表达在对照组、Coolidge效应组间未见显著差异。大鼠第1次Coolidge效应、第16次Coolidge效应后，下丘脑组织Oxytocin的含量，与对照组比较，显著升高（P<0.01）。反复Coolidge效应大鼠下丘脑内啡肽、强啡肽、脑啡肽的含量在第1次和第16次Coolidge效应后，和对照组比较，均没有显著改变。Oxytocin在下丘脑的表达在反复Coolidge效应大鼠显著升高，平均荧光强度增加（P<0.01），并且和CRH神经元共定位明显。采用γ-GABAergic神经元阻断剂bicuculline、谷氨酸释放抑制剂选用BW619C89均不能纠正Coolidge效应组大鼠的皮质酮水平降低，但给与了oxytocin受体阻断剂的大鼠，与单纯Coolidge效应组比较，皮质酮水平没有显著差异。结果显示oxytocin在下丘脑表达水平升高是反复Coolidge效应导致HPA轴功能降低的主要机制。补肾中药右归饮对反复Coolidge效应大鼠的性功能、HPA轴功能、氧化损伤有一定恢复作用。