lncRNA-uc010fhn.2介导CTHRC1对异位子宫内膜细胞迁徙的调控作用研究

How endometrial cell receive celluar signals to migrate outside is the key step in the process of EMs incidence and recurrence. The present research take advantage of our previous lncRNA chip research results, that highly expressed lncRNA-uc010fhn.2 and its closely related gene CTHRC1 to explore how lncRNA-uc010fhn.2 induce CTHRC1 to regulate endometrial cell migration. After forward activation and reverse inhibition of lncRNA-uc010fhn.2 in endometrial cell, transwell experiment and confocal laser scanning microscopy methods are used to reveal the relationship of lncRNA-uc010fhn.2 and endometrial cell migration. Then immune co-precipitation technique is applied to define the candidate signal proteins and pathways, which directly interact with CTHRC1 and related to endometrial cell migration. Furthermore, we detect the candidate signal molecules expression changes by realtime RT-PCR and westernblot analysis. In the end, we testify all the invitro effects through invivo test. This project intends to further explore the pathogenesis of EMs from a new angle of view. We hope it will help to provide some new targets for the early diagnosis, treatment and prognosis of endometriosis.

子宫内膜细胞如何接收内外信号引起细胞迁徙是EMs发病及复发的关键步骤，本项目利用前期lnc芯片筛查出在异位子宫内膜细胞显著高表达的lncRNA-uc010fhn.2，并通过mRNA共表达分析筛选出受其正调控且与肿瘤细胞迁徙密切相关的共表达基因CTHRC1，探讨lncRNA-uc010fhn.2介导CTHRC1调控异位子宫内膜细胞迁徙的作用及机制。项目通过正向激活、反向抑制lncRNA-uc010fhn.2的方法转染子宫内膜细胞，运用transwell实验、激光扫描共聚焦等手段，揭示lncRNA-uc010fhn.2与子宫内膜细胞迁徙的相关性；采用免疫共沉淀技术确定与CTHRC1相互作用、可能参与子宫内膜细胞迁徙的候选信号蛋白和传导通路，检测沉默后CTHRC1及候选信号分子的表达变化，并进行体内验证。本项目从新的角度深入揭示EMs的发病机制，有望为内异症的早期诊断、治疗及预后提供新的策略。

子宫内膜异位症（EMs）是导致女性不孕与慢性盆腔疼痛的重要原因之一，其确切的发病机制目前尚不十分清楚。子宫内膜细胞接收内外信号引起增殖、粘附、迁徙及侵袭能力的改变，是EMs发病及复发的关键环节。lncRNA是长度大于200nt的不具有编码能力的RNA分子，可在基因复制、转录、翻译等多个环节发挥调控功能。其在各类疾病中的重要作用正受到越来越多的重视。本项目前期利用lncRNA芯片技术，筛选出在异位子宫内膜组织中高表达的lncRNA-uc010fhn.2分子，并通过coding-noncoding共表达分析筛选出与其高度正相关的CTHRC1分子。在后续研究中，首先通过免疫组化和Western Blot技术，验证CTHRC1在异位内膜组织中表达显著增高。后利用CTHRC1特异性siRNA转染原代培养的异位子宫内膜间质细胞（ESC）：CTHRC1敲减后，ESC的增殖、粘附、迁徙和侵袭能力显著降低；同时，MMP9、MMP2、CD44、TGF-β1、ICAM1、E-cadherin等肿瘤相关蛋白表达改变，ERK1/2磷酸化水平改变。提示CTHRC1可能通过调节多种关键蛋白与信号通路，参与调节ESC的增殖与代谢。另一方面，qPCR检测结果显示lncRNA-uc010fhn.2在异位内膜组织中表达上调，与CTHRC1正相关。通过特异性siRNA敲减原代ESC中lncRNA-uc010fhn.2表达，可在转录水平降低CTHRC1的表达。提示lncRNA-uc010fhn.2可能通过调控CTHRC1转录表达，发挥重要的生物学调节作用。本项目从新的角度深入揭示了EMs的发病机制，有望为内异症的早期诊断、治疗及预后提供新的策略。