从调节Wnt/Nurr1通路与干细胞Niche研究补肾活血复方改善帕金森鼠神经干细胞动态平衡的机制

Parkinson's disease (PD) has been proved to be a kind of chronic Neural Stem Cells (NSCs) differentiation defect, which is affected by the microenvironment in vivo. The Traditional Chinese Medicine considers that kidney deficiency and blood stasis are the pathological basis of PD. The NSCs Niche plays an important role in regulating the proliferation and differentiation of NSCs. Previous studies have found that the tonifying kidney and promoting blood recipe can promote the proliferation and differentiateof NSCs, reduce apoptosis, and provide repair for PD brain injury. This research propose Wnt/Nurr1 signaling pathway as the key point, in combination with PD rat model constructing, the behavior analysis, RT-PCR, WB, Co-IP ways, to expore the tonifying kidney and promoting blood recipe improve the PD rat hippocampus stem cell niche microenvironment, and make NSCs self-renew、proliferation and differentiation to achieve dynamic balance, provides part of scientific basis for the PD treatment of tonifying kidney and promoting blood.

帕金森病(Parkinson’s disease, PD)是一种慢性的神经干细胞(Neural Stem Cells, NSCs)分化缺陷，并受到体内微环境的影响。中医理论认为肾虚血瘀是PD的病理基础，故应以补肾活血法治疗。NSCs生存的微环境（即神经干细胞龛/Niche）对NSCs的增殖与分化具有重要的调节作用。前期研究发现，补肾活血复方中药能促进干细胞Niche内NSCs的增殖、并分化为神经元细胞，减少凋亡，为PD脑损伤提供修复。本课题拟以Wnt/Nurr1信号通路为切入点，构建PD大鼠模型，采用行为学分析、RT-PCR、WB、免疫共沉淀等技术手段，揭示补肾活血复方改善帕金森鼠海马区干细胞龛微环境，使NSCs自我更新、增殖与分化达到动态平衡的分子机制，为PD补肾活血中药的研究和开发提供部分科学依据。

帕金森病（PD）是一种慢性的神经干细胞分化缺陷，并受到体内微环境的影响。中医理论认为肾虚血瘀是PD的病理基础，故应当采取补肾活血法治疗。NSCs生存的微环境（即神经干细胞龛）对NSCs的增殖分化具有重要的调节作用。前期研究发现，补肾活血复方中药能促进干细胞龛内NSCs的增殖，并分化为神经元细胞，减少凋亡，为PD脑损伤提供修复。.本课题主要包含以下几个研究内容：补肾活血复方的关键成分含量鉴定及质控；补肾活血复方改善帕金森大鼠的症状表型；补肾活血复方对神经干细胞Niche的微环境影响；补肾活血复方通过Wnt/Nurr1转录调控改善帕金森大鼠神经干细胞增殖分化。 通过构建6-OHDA诱导的PD大鼠模型；动物给药及行为学检测，观察了补肾活血复方治疗PD的整体动物行为表现；发现药物能显著改善PD疾病表型。病理学分析检测了多巴胺含量、脑室下区TH阳性细胞，展示了不同处理组之间神经细胞凋亡存活的情况。检测了各组大鼠sFas、sFasL 表达水平，苁蓉舒痉颗粒可以显著地降低血清内血管凋亡因子的表达水平。并提高血清SOD、GSH-Px、TAC、CAT、GST、GR 等抗氧化分⼦子表达⽔水平，提高干细胞龛内环境的健康度。免疫荧光结果显示，苁蓉舒痉中、高剂量组的Nestin阳性细胞、Brdu与Nestin共定位细胞在中脑区的表达较模型组显著升高，低剂量组较模型组则无统计学意义。Western blot结果显示，苁蓉舒痉低、中、高剂量组的β-catenin的磷酸化水平降低，β-catenin、wnt7a、wnt3a、cyclin D1、PPAR-γ蛋白的表达量均有一定程度的升高。该调控作用的关键靶标蛋白Nurr1与β-catenin具有较强的相关性，即可能存在共表达/交互作用，其机制有待于更深入的研究。.本实验研究表明，补肾活血复方能够改善PD模型大鼠的行为学损伤，并且促进大鼠纹状体黑质TH的表达，具有神经保护作用，同时能够促进大鼠中脑神经干细胞的增殖，相关的机制与Wnt/β-catenin/ Nurr1信号通路的活化有关。 本项目为苁蓉舒痉颗粒的药理学机制进行研究，从分子生物学角度深入阐明补肾益髓复方中药对神经干细胞的影响和在疾病发生中的作用。本研究的结果将为苁蓉舒痉颗粒复方药的进一步推广和投入临床使用提供更加可信的实验证据。