溃疡性结肠炎肠道粘膜免疫功能在抗霉菌作用中的机制及意义探讨

Dysbiosis of the gut microbiota are implicated in the pathogenesis of ulcerative colitis (UC). Gut contained fungal community may participate in the development of UC. Intestinal epithelial cells（IECs）play an important role in maintaining the intestinal homeostasis. While there is no report about the relationship between fungi and IECs in UC at present. In previous experiments, We have found that the proportion of opportunistic pathogenic fungi increases,whereas nonpathogenic decreases in IBD patients' faeces, and expression of Dectin-1 was increased in colonic tissues in patients with UC. We hypothesized that fungi could activate the inflammatory response through Dectin-1 signaling to release cytokines, and further induce the injury of the epithelial barrier. In this study, we will focuse on the the mechanism of Dectin-1 signaling in anti-fungi response and the influence on epithelial barrier functions. We will answer the following scientific questions: ①The role and mechanism of IECs play in anti-fungi response through Dectin-1 signaling. ②The change and mechanism of fungal infection in IECs' apoptosis and intercellular permeability.③Whether the anti-fungal therapy and the regulation of Dectin-1 functions can alleviate the intestinal inflammation and improve the healing of the intestinal mucosa.

肠道菌群失调是溃疡性结肠炎（UC）的发病机制之一，肠道中含有的共生霉菌可能参与UC的发生发展。肠道上皮细胞（IECs）发挥着重要的免疫屏障功能维持肠道稳态。目前，尚未见到霉菌与IECs关系的报道。我们前期研究发现与健康人群相比，UC患者肠道中机会致病霉菌数量增多，而非致病霉菌减少，并且发现肠道活检组织中霉菌识别受体Dectin-1表达水平明显升高。因此我们假设，霉菌通过Dctin-1的识别激活下游通路释放炎症因子损伤上皮屏障。本研究着重研究UC中Dectin-1信号通路抗霉菌作用的具体调控机制以及对IECs屏障功能的影响。拟回答以下科学问题：①UC中IECs通过Dctin-1发挥抗霉菌的作用及其机制；②霉菌感染对IECs凋亡及细胞间隙通透性的影响及机制；③通过抗霉菌治疗及调控Dectin-1的作用，是否可达到缓解肠道炎症，促进粘膜愈合的目的。

肠道菌群失调是溃疡性结肠炎（UC）的发病机制之一，肠道中含有的共生霉菌可能参与UC的发生发展。肠道上皮细胞（IECs）发挥着重要的免疫屏障功能维持肠道稳态。本期研究对30例溃疡性结肠炎（UC）患者和20例健康体检者的肠道活检标本中dectin-1，IL-23p19， NF-kb 途径蛋白表达进行检测，结果显示：1）在mRNA 水平，UC 患者肠道活检组织中的Dectin-1 水平较正常人明显升高，且在UC 患者中CRP水平与Dectin-1 的mRNA 相对表达量呈正相关；2）IL23p19 与Dectin-1 表达部位相同，UC 患者肠道活检组织的IL23p19 水平较正常人群明显升高； 3）UC 患者肠道黏膜组织中的磷酸化IkB 和NF-kBp65 表达水平较正常对照者明显增高。.为进一步研究dectin-1 与霉菌菌群失调在肠上皮屏障功能失调中的作用，本课题通过将肠上皮细胞HT29 分别与热带假丝酵母菌和酿酒酵母菌进行共培养。初步结果显示细胞中加入霉菌共培养后p-SYK，IL23p19，及p-NF-kB 蛋白表达量较空白组和加入了dectin-1阻断剂 受体及NF-kB 通路阻断剂后再与霉菌共培养的小组明显升高。.本课题收集了溃疡性结肠炎、克罗恩氏病和正常无疾病者的血液标本，并对其进行Elisa 分析，发现疾病组的IL-12 及IL-23 水平较正常人有明显升高。.dnTGF-βRII 小鼠可自发产生与人类IBD 相似的免疫性结肠炎。Curdlan 为(1,3)-β-glucan，是真菌胞壁的成分之一。我们用Curdlan 对dnTGF-βRII 小鼠和野生型C57BL/6小鼠进行每周一次的灌胃，共七周。结果显示：使用curdlan 灌胃的dnTGF-βRII 小鼠中体重减轻，隐窝消失，炎症细胞浸润等结肠炎表现更为严重，其肠道上皮IL-23p19 的表达明显上升。.综上所述，我们在人体水平证实了UC 患者肠道上皮细胞可能通过C 型凝集素受体Dectin-1 的表达，识别肠道中异常分布的霉菌，进而激活下游NF-kB 信号通路，并促进上皮黏膜中炎症因子IL-23p19 的释放，加重肠道炎症反应，损伤肠道上皮屏障功能，参与UC 的发生、发展；同时在细胞水平对dectin-1 和霉菌相互作用在肠道炎症发生发展中的作用进行了初步的探讨，为今后课题研究工作打下坚实的基础，