猪胆粉中抗溃疡性结肠炎的活性物质及其作用机制研究

Ulcerative colitis (UC) is a common inflammatory bowel disease and the incidence rate increases every year. The World Health Organization calls it a "refractory disease". The pathogenesis and molecular biological mechanism of UC have not yet been elucidated, but imbalances between pro-inflammatory cytokines, anti-inflammatory cytokines and inflammatory proteins expression are believed to play an important role in the pathophysiology of this disease. The inhibition of pro-inflammatory cytokines activation, reduction of colonic epithelial cells injury and inhibition occurrence and development of inflammation are the key factors in treatment. The medicines for UC therapy have severe adverse reactions currently. Therefore, the development of high effective and safe medicines from traditional Chinese medicine has vast importance to UC treatment. Pulvis Fellis Suis is a traditional Chinese medicine which has been used for treatment of diarrhea and dysentery. Our previously research showed that Pulvis Fellis Suis extracts (conjugated cholic acids) have anti-inflammatory effect in mice with UC. The project prepares to complete: 1. Elucidating anti-inflammatory active substance in Pulvis Fellis Suis for UC treatment; 2. Investigating mechanism of conjugated cholic acid control TNF-α, IL-1β, COX-2, iNOS expression through NF-κB/PPAR-γ signal pathway, and elucidating molecular mechanism of UC treatment by conjugated cholic acid. The accomplishment of this project will have theoretical and practical significance to UC therapy and conjugated cholic acid utilization.

溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)是一种常见的肠道炎症性疾病，近年来发病率呈逐年上升趋势，被世界卫生组织列为现代难治病之一。炎症因子表达平衡失调所致的免疫异常被视为UC的重要发病机制。如何用药物抑制炎症相关因子活化，减轻结肠上皮细胞损伤，抑制炎症的发生及发展，是UC治疗的关键。目前治疗UC的药物普遍存在严重的不良反应，从中药中开发高效、安全的药物用于UC的治疗具有重要意义。猪胆粉是我国治疗泄泻、痢疾的传统中药，前期研究发现猪胆粉对 UC具有较好的治疗作用。本项目拟完成：1.探明猪胆粉中发挥抗溃疡性结肠炎活性的药效物质基础；2.探讨猪胆粉中结合型胆酸通过NF-κB/PPAR-γ信号途径调控TNF-α、IL-1β、COX-2、iNOS等表达的作用机制，阐明结合型胆酸治疗UC的分子机制。本项目的完成将对UC的治疗和含结合型胆酸中药的应用具有重要的理论和实践意义。

溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis，UC）是一种慢性非特异性肠道炎症性疾病，近年来发病率呈逐年上升趋势，已成为我国消化系统的常见病。炎症因子表达平衡失调所致的免疫异常被视为UC的重要发病机制。目前治疗UC的药物普遍存在严重的不良反应，从中药中筛选出高效、安全的药物用于UC的治疗具有重要意义。猪胆粉是我国治疗泄泻、痢疾的传统中药，前期研究发现猪胆粉对UC具有较好的疗效，但其治疗UC的活性物质基础及作用机制尚未明确。据此，本课题首次对猪胆粉抗溃疡性结肠炎的活性物质基础及作用机制进行研究。实验采用三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的UC小鼠模型，对结合型总胆酸中六种主要成分牛磺猪胆酸（THCA）、牛磺猪去氧胆酸（THDCA）、牛磺鹅去氧胆酸（TCDCA）、甘氨猪胆酸（GHCA）、甘氨猪去氧胆酸（GHDCA）和甘氨鹅去氧胆酸（GCDCA）的抗溃疡性结肠炎活性进行筛选。实验结果显示THCA、THDCA、TCDCA、GHCA、GHDCA和GCDCA均能减轻UC小鼠结肠组织损伤程度，降低结肠组织中MPO活性和TNF-α、IL-1β、IL-6水平，具有一定的抗溃疡性结肠炎活性，其中THDCA抗炎活性最强。在此基础上，采用TNBS诱导的UC小鼠模型，系统研究了THDCA对UC的治疗作用及作用机制。实验结果显示：（1）THDCA能够减轻UC小鼠结肠组织损伤程度，降低UC小鼠结肠指数和脾脏指数，提高胸腺指数；（2）THDCA能显著降低UC模型小鼠结肠组织中MPO活性，减少炎性细胞浸润；（3）THDCA能有效提高小鼠结肠组织中SOD、GSH、CAT活性，提高机体抗氧化能力，同时能降低小鼠结肠组织中MDA含量，有效抑制机体脂质过氧化反应，减轻组织中过氧化损伤程度；（4）THDCA能降低结肠组织中TNF-α、IL-1β、IFN-γ含量，抑制结肠组织中TNF-α、IL-1β、IFN-γmRNA表达；（5）THDCA能降低结肠组织中NO含量，抑制iNOS和COX-2蛋白表达；（6）THDCA能下调结肠组织中NF-κB蛋白表达水平，上调PPAR-γ蛋白表达水平。以上实验结果表明THDCA对UC具有明显的治疗作用，THDCA能调节免疫，维持细胞因子的网络平衡，抑制炎症介质释放，减轻氧化损伤，并通过调节NF-κB/PPAR-γ信号通路的传导发挥治疗溃疡性结肠炎的作用。